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热休克蛋白类似73文献资料
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基因重组人HSP73抗体的制备及对肿瘤细胞在温热作用后HSP70表达的检测
目的用基因工程方法表达、提纯人热休克类似蛋白73(HSP73),制备抗体,检测吐温80协同41℃温热对肿瘤细胞HSP70表达的影响.方法用人HSP73基因构建原核细胞表达载体pETHSP73,在大肠杆菌BL21中用半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经电泳法和ATP亲和层析法提取HSP73并作检测.用提纯蛋白免疫新西兰兔,制备抗HSP70多克隆抗体,测定其活性,用此抗体作免疫组化法观察41℃温热和吐温80协同时BGC-823胃癌细胞及B16黑色素瘤细胞的热休克蛋白70(HSP70)表达情况.结果人基因重组构建的pETHSP73能很好地在大肠杆菌中表达出分子量为73kD的蛋白.两种提纯方法均能有效提取表达蛋白,用3a3单抗作Westrn blot检测证明该蛋白具有人HSP70的抗原活性,所得蛋白氨基酸测定和N端测序的结果与有关报道一致.以此蛋白制成的抗体活性可达1:8000以上.并可检测出吐温80合并温热有明显抑制肿瘤细胞SHP70表达的作用.结论2.1kb的基因片段构建的高表达载体能很好表达人HSP73活性蛋白.该蛋白免疫新西兰兔所得多克隆抗体具有很高抗人和鼠HSP70活性.用该抗体免疫组化法检测表明吐温80协同41℃温热可明显抑制肿瘤细胞HSP70的表达和耐热性的产生.
