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肺腺癌靶向基因放射治疗的体内研究及小动物正电子发射计算机体层摄影评价疗效的可行性
目的：探讨靶向基因放射治疗在裸鼠肺腺癌模型中的联合抗肿瘤作用，以及应用小动物正电子发射计算机体层摄影（ Micro-PET-CT）动态评价疗效的可行性。方法建立肺腺癌A549裸鼠模型，并分为重组杆状病毒联合放疗组（即重组杆状病毒瘤内注射＋放疗组、重组杆状病毒尾静脉内注射＋放疗组、重组杆状病毒肌内注射＋放疗组）、单纯放疗组和对照组，计算其肿瘤生长抑制率和肿瘤生长延缓时间。采用Micro-PET-CT动态评价18 F-FDG代谢变化，采用免疫组化法检测肿瘤组织中血管内皮生长因子（ VEGF）、CD31和Ki-67的表达情况。结果重组杆状病毒联合放疗组的肿瘤生长延缓时间＞12 d，肿瘤抑制率＞45％，高于单纯放疗组（P＜0．05）。免疫组化结果显示，重组杆状病毒联合放疗组的VEGF、CD31和Ki-67表达显著低于单纯放疗组和对照组（ P＜0．05）。 Micro-PET-CT显像显示，重组杆状病毒联合放疗组的肿瘤大标准摄取值（ SUVmax ）较对照组和单纯放疗组明显降低（P＜0．05），且重组杆状病毒瘤内注射＋放疗组、重组杆状病毒尾静脉内注射＋放疗组、重组杆状病毒肌内注射＋放疗组和单纯放疗组裸鼠治疗后肿瘤体积与SUVmax正相关（ r分别为0．976、0．954、0．929和0．871，P＜0．05）。结论重组杆状病毒Bac Egr1-K5联合放疗增强了抑制肺腺癌生长的作用， Egr1启动子的射线可诱导性实现了治疗的靶向性及可控性。 Micro-PET-CT显像结果与治疗效果相关性好，可用于活体肿瘤的功能评价。
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人纤溶酶原Kringle 5区的基因克隆的表达及纯化
目的克隆人纤溶酶原Kringle5(K5)区基因,并进行重组蛋白的表达纯化及活性鉴定.方法用PCR方法从正常成人肝cDNA库扩增出人纤溶酶原K5区基因,构建K5的原核表达载体pET-22b(+)-K5-6×His,IPTG诱导蛋白表达后经Ni+-树脂亲和层析进行纯化,通过血管内皮细胞增殖抑制试验检测蛋白活性.结果经PCR成功扩增出了243 bp的K5区基因,测序正确后克隆进大肠杆菌分泌型表达载体pET-22b(+),重组质粒在BL21中成功表达出分子量为14 000的蛋白质,纯化后的蛋白纯度达95%,具有抑制血管内皮细胞增殖活性的功能,K5蛋白浓度为4 μg/mL时抑制率达50%.结论纤溶酶原K5的成功克隆、表达及纯化可能在肿瘤和动脉粥样硬化的抗血管生成治疗中具有一定作用.
关键词： 人纤溶酶原Kringle5 质粒构建 蛋白纯化
