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纳米粒子介导E1A基因体外转染人甲状腺未分化癌细胞HTC/3
目的 探讨纳米粒子介导E1A基因转染人甲状腺未分化癌细胞HTC/3的可行性和效率,并检测转染细胞对X线的敏感性和X线诱导转染细胞凋亡.方法 应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物和聚乙烯醇包载E1A基因,制备纳米级粒子混合物,检测其包埋率、体外释放情况及粒径大小.用制备的包裹DNA纳米粒子转染人甲状腺未分化癌细胞HTC/3,并以阳离子脂质体为对照,用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测转染细胞(HTC/3-E1A)的E1A基因mRNA表达.四甲基偶氮唑盐(MTF)法检测HTC/3-E1A细胞、对照细胞的体外生长率和不同剂量X射线对HTC/3-E1A细胞的生长抑制率.HTC/3-E1A细胞经一定剂量X线(2 Gy)照射后,用流式细胞仪进行细胞周期分析,DNA电泳观察细胞凋亡.结果 制备的纳米粒子直径为150～280 nm,包埋率为0.78%,体外释放约为18 d.在转染相等质量的DNA情况下,纳米组所得克隆数多于脂质体组(P＜0.05).RT-PCR结果表明,纳米粒子和脂质体转染细胞均有E1A基因mRNA表达.HTC/3-E1A细胞群体生长缓慢,倍增时间延长(是亲本细胞的1.44倍).HTC/3-E1A细胞对X线敏感性较转染空载体细胞(HTC/3-Vect)和HTC/3细胞分别提高约2.9倍和2.8倍.流式细胞仪分析显示,HTC/3-E1A细胞亚G0/G1期比例显著高于HTC/3-Vect和HTC/3细胞(P均＜0.01),S期比例显著低于HTC/3-Vect细胞和HTC/3细胞(P均＜0.01).DNA电泳显示,HTC/3-E1A细胞出现典型的凋亡梯度变化,而HTC/3-Vect和HTC/3细胞无此变化.结论 纳米粒子可携带外源基因进行基因转染并获得表达,转E1A基因HTC/3细胞对X线敏感性明显提高,且X线诱导了转E1A基因HTC/3细胞凋亡.
关键词： 纳米粒子 载体 E1A基因 基因转染 人甲状腺未分化癌细胞系HTC/3
