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  • 小干扰 RNA 沉默人乳头瘤病毒16E6基因对子宫颈癌 SiHa 细胞系中 E-钙黏蛋白表达及高甲基化的影响

    作者:张弦;陈亦乐;李乐赛

    目的:研究小干扰 RNA(siRNA)沉默人乳头瘤病毒(HPV)16E6基因对子宫颈癌 SiHa细胞系中 E-钙黏蛋白(E-cad)表达及其基因启动子区高甲基化的影响。方法运用以慢病毒为载体质粒的 siRNA 沉默子宫颈癌 SiHa 细胞系中 HPV16E6基因。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法及蛋白质印迹法(Western blot)分别检测沉默后 SiHa 细胞中 HPV16E6 mRNA 表达水平、E-cad mRNA及蛋白表达水平。用甲基化特异性 PCR(MSP)法检测 SiHa 细胞系中 E-cad 基因(CDH1)启动子区甲基化情况。结果 siRNA E6组、空载体组、空白对照组 E-cad mRNA 相对表达量分别为4.755±1.085、1.224±0.840、1.327±1.221,蛋白相对表达量分别为0.616±0.019、0.325±0.016、0.299±0.015,其中siRNA E6组 SiHa 细胞中 E-cad mRNA 及蛋白相对表达量明显高于另两组,差异均有统计学意义(F=21.346,P<0.01;F=323.398,P<0.01),而空载体组和空白对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。与HPV16E6基因沉默前 E-cad 完全甲基化状态相比较,沉默后 E-cad 基因甲基化扩增产物呈弱阳性,其强度较空载体组及空白对照组明显减弱,而非甲基化扩增呈阳性。结论 HPV16E6基因沉默可使子宫颈癌SiHa 细胞中 E-cad 表达上调,同时能够降低 CDH1基因启动子区高甲基化水平,可能在一定程度上扭转CDH1基因启动子区的高甲基化状态,引起 E-cad 重新表达。

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