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大鼠催乳素腺瘤MMQ细胞株肿瘤干细胞样细胞的培养和鉴定
目的 探索大鼠垂体催乳素腺瘤MMQ细胞株中肿瘤干细胞样细胞的体外培养条件,并观察其增殖、分化及种植成瘤的特点.方法 采用含表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的无血清培养液悬浮培养MMQ细胞,获得肿瘤干细胞样细胞球(简称细胞球),行克隆培养,观察其增殖能力;应用流式细胞技术测定CD133阳性细胞比例,Western blot试验测定细胞球CD133、巢蛋白(nestin)的表达,免疫荧光技术检测细胞球CD133、nestin、归巢细胞黏附分子(HCAM/CD44)、八聚体结合转录因子4(OCT4)、干细胞抗原1(SCA1)的表达,以及细胞球分化细胞的胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经微管蛋白([3-tublinⅢ)和S100蛋白的表达.取雌性裸鼠27只,随机分为细胞球种植组、MMQ细胞种植组和正常对照组,每组9只.皮下种植6周后,测量肿瘤体积及血清催乳素(PRL)水平,肿瘤组织切片行HE染色和免疫组化检测.结果 在无血清培养液悬浮培养条件下,仅少数细胞能存活并形成细胞球,吹散后细胞能克隆增殖成球,细胞球中CD133阳性细胞比例为(1.10±0.17)％.细胞球上CD133、nestin、HCAM/CD44、OCT4和SCA1呈阳性表达;细胞球分化后,细胞阳性表达GFAP、β-tublinⅢ和S100蛋白.细胞球种植组成瘤体积为(1262.2±279.1)mm3,MMQ细胞种植组为(495.9±158.9) mm3,P ＜0.05;细胞球种植组荷瘤裸鼠血清PRL[中位数(P25,P75)]为36.08(34.23,41.42) ng/ml,MMQ细胞种植组为21.51 (20.39,22.98) ng/ml,均高于正常对照组的0.26(0.15,1.03) ng/ml,P＜0.05.肿瘤组织HE染色显示,与大鼠垂体腺瘤相似的特征;免疫组化染色显示,PRL和神经突触素(Syn)表达阳性.结论 大鼠垂体催乳素腺瘤MMQ细胞株中存在少量具有肿瘤干细胞样细胞特性的细胞,并能在体外培养成功.
