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重组人促红细胞生成素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤所致NF - κB和IκB表达的影响
目的 探讨NF - κB和IκB在重组人促红细胞生成素(r- HuEPO)对大鼠局灶性脑缺血再灌注炎性反应损伤的保护机制中的作用.方法 采用栓线法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO),应用免疫组化和Western blot分别检测缺血脑组织NF - κB和IκB的表达,IL-1β蛋白含量采用ELISA法确定.结果 与假手术组相比,脑缺血2h再灌注3h后缺血侧皮质IL- 1β含量显著升高至(86.2±25.2)pg/ml(P＜0.05),再灌注24 h IL- 1β含量达高峰(867.2±74.3)pg/ml(P＜0.01),72 h仍处于较高水平(185.5±24.4)pg/ml(P＜0.01).EPO治疗组缺血再灌注3h、6h、12 h(164.1±11.6)pg/ml和24h缺血侧皮质IL- 1β含量显著降低,与病理组相应时间点相比,分别降低了55％、33％、56％和50％(P＜0.01).脑缺血再灌注组各时相点NF - κB p65表达及活化明显增加,为Sham组的4～8倍(P＜0.01),12h表达高(P＜0.01),是Sham组的13倍.EPO治疗组与病理组相应时相点相比,NF - κB p65表达显著减弱,EPO处理后1、3、6和12 h,NF - κB p65表达较相应的I/R组降低了33％ ～40％(P＜0.01).缺血2h再灌注1h后缺血侧皮质IκBα蛋白水平从248.6±4.2降低至195.3±4.8(P ＜0.01),6h降至低(134.7±19.9,P＜0.01).EPO治疗组可显著增高缺血再灌注组缺血侧皮质IκBa蛋白水平(P＜0.01),各时相点分别增高了11％、34％、83％、40％、23％和20％.结论 EPO可能通过抑制NF - κB/IκB信号传导通路,减少炎性因子IL-1β的合成和分泌而达到保护脑损伤的作用.
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电针联合脂肪源性干细胞移植对大鼠脑缺血/再灌注PARP和NF-κB表达的影响
目的:探讨电针联合脂肪源性干细胞(ADSC)移植对大鼠缺血/再灌注损伤后海马区炎症介质NF - κB、PARP表达和神经功能恢复的影响.方法:成年大鼠随机分为模型组、电针组、ADSC移植组、电针+ ADSC组.NSS法行神经功能损害评分,应用Western bolt法及实时荧光定量PCR检测海马区NF - κB和PARP的表达.结果:电针+ADSC组NSS评分低于单独治疗组,海马区PKH - 26标记的细胞个数高于ADSC组.与模型组比较,电针+ADSC组和电针组NF - κB和PARP表达降低.结论:电针联合ADSC移植促进脑缺血大鼠神经功能恢复作用优于单独治疗组,其机制可能与电针下调炎症递质NF - κB和PARP的表达,抑制炎性反应,促进移植的ADSC迁移和存活有关.
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5F诱导的HepG2细胞凋亡与NF - κB活性抑制有关
目的 调查中草药半边旗(PsL)提取物Ent - 11α - hydroxy - 15 - oxo - kaur - 16 - en - 19 - oic - acid (5F)诱导HepG2细胞凋亡的机制.方法 通过生存及细胞凋亡分析检测5F对HepG2的增殖抑制效果.同时,采用免疫印迹法评价5F对细胞株HepG2细胞核NF - κB/p65、胞浆IκBα表达的影响.结果 MTT分析证实5F处理呈剂量依赖、时间依赖方式抑制了HepG2增殖.形态分析及Annexin V- EGFP染色则确认了5F诱导的细胞凋亡.而且,该凋亡伴随着IxBα表达的提高、NF - κB/p65表达的降低.结论 5F所诱导HepG2细胞凋亡与IκB生成导致的NF - κB活性抑制有关.
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Gambogic Acid 通过影响 NF -κB 信号通路诱导 A549细胞凋亡
目的：研究 Gambogic Acid（GA）对人非小细胞肺癌 A549细胞系中 NF -κB 信号通路的影响及其对细胞凋亡的促进作用。方法：Western blot 法和共聚焦显微镜成像技术检测 GA 对 NF -κB 的信号通路的影响，MTT 及流式细胞（FCM）术检测 GA 对 A549细胞的促凋亡作用。结果：Western blot 发现 GA 能显著抵抗TNF -α诱导导致的 IκB 磷酸化水平上升及 IκB 的降解；共聚焦显微镜成像进一步发现 GA 有效阻止了 NF -κB 入核；MTT 结果显示 GA 能显著抑制 A549细胞的增殖，当药物浓度为5.0μmol/ L 时抑制率可达到（93.5±6.5）%（P ﹤0.05），IC50值为1.2±0.4μmol/ L；凋亡检测结果显示 A549细胞在0.0、0.5、1.0、2.0、3.0及5.0μmol/ L 药物处理下细胞凋亡率分别是（6.0±0.7）%、（15.5±2.3）%、（35.0±3.6）%、（43.5±2.7）%、（43.0±3.8）%及（53.7±2.6）%（P ﹤0.05）；结论：实验表明，GA 能有效地抑制 A549细胞增殖和诱导其凋亡，其机制可能是通过影响 NF -κB 信号通路而发生作用。
关键词： A549 Gambogic Acid NF - κB 细胞凋亡 -
靶向 siRNA 沉默 NF -κB/p65对肺腺癌细胞株 A549增殖与凋亡的影响
目的：研究运用 RNA 干扰（RNA interference，RNAi）技术抑制 NF -κB/ p65基因的表达对人肺腺癌细胞株 A5492细胞增殖、周期及凋亡的影响，探讨 NF -κB/ p65基因在肺腺癌发生发展中的作用。方法：利用阳离子脂质体 LipofectamineTM2000将人 NF -κB/ p65的小干扰 RNA 转染入肺腺癌细胞株 A549中。运用 real time - PCR 和 Western blot 技术检测 A549细胞内 NF -κB/ p65、增殖相关基因 Cyclin D1和凋亡相关基因 Bcl-2、Bax 的 mRNA 的转录水平和蛋白的表达情况，MTT 法检测细胞的增殖活力，显微镜下观察细胞的生长情况。结果：NF -κB/ p65 siRNA 能有效地抑制 A549细胞中 NF -κB / p65基因在 mRNA 水平上的表达（P﹤0.001），同时下调 Cyclin D1和 Bcl -2的表达（均 P ﹤0.01）。上调 Bax 表达（P ﹤0.001）；蛋白表达也具同样趋势。MTT 实验证明 p65 siRNA 转染组中细胞增殖减慢；显微镜镜下观察显示，细胞生长减慢，凋亡形态改变明显。结论：体外实验初步证明 NF -κB/ p65基因在肺腺癌细胞株 A549增殖分化与凋亡方面扮演重要角色，通过沉默其表达可抑制肺腺癌细胞株 A549增殖并诱导其凋亡。进一步证实 NF -κB/ p65对 Cyclin D1、Bcl -2、Bax 具有调控作用，他们共同参与了肺腺癌的发生发展过程。
