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不同类型精子缺陷与印记基因H19甲基化水平关联性研究
目的:探讨不同类型精子缺陷与印记基因H19印记控制区域甲基化水平的相关性.方法:以2014年4月至2014年9月间入院诊治的男性不育患者为研究对象,排除患有精索静脉曲张、隐睾症、核型异常和Y染色体微缺失的病例,依据临床精液常规检查结果,分别筛选出特发性少精子症患者(浓度＜ 20×106/mL,其余指标均正常)、特发性弱精子症患者(前向运动精子百分率＜50％,其余指标均正常)、特发性畸形精子症患者(正常精子形态比率＜15％,其余指标均正常)各25例;25例正常精液样本作为对照组.采用焦磷酸测序法定量分析各组精子DNA中H19基因印记控制区域的甲基化水平.结果:少精子症组[(75.04±15.35)％]和弱精子症组[(79.48±11.64)％]印记基因H19甲基化水平显著低于正常对照组[(89.10±11.23)％],差异均有统计学意义(P =0.006,P=0.024);畸形精子症组[(87.82±12.10)％]与正常对照组H19基因甲基化水平的差异无统计学意义(P =0.758).结论:印记基因H19印记控制区域的DNA甲基化程度的降低与少精子症和弱精子症有关联,可能与畸形精子症无关.
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MSRE-qPCR法检测少弱精子症患者父源印记基因H19上游区域甲基化水平
目的 建立精子中父源印记基因H19上游区域MSRE-qPCR检测方法,并分析男性少弱精子症患者精子父源印记基因H19上游区域甲基化水平.方法 收集20例正常精液样本,同时筛选30例少弱精子症患者精液样本,应用甲基化敏感性限制性内切酶法并结合定量PCR对所有样本父源印记基因H19上游区域甲基化水平进行分析.结果 正常精液样本父源印记基因H19上游区域平均甲基化率为(99.8±2.72)％,高于少弱精子症患者精液样本的(82.4±15.30)％,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 MSRE-qPCR法可用于父源印记基因H19上游区域甲基化水平的检测,少弱精子症者精液样本父源印记基因H19上游区域甲基化水平显著低于正常人.
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父源印记基因H19印记控制区域DNA甲基化与少、弱精子症相关性分析
目的:研究印记基因H19印记控制区域的DNA甲基化程度与男性少、弱精子症的相关性. 方法:通过染色体核型分析和Y染色体微缺失检测排除染色体因素干扰,进一步借助精液常规参数、伊红染色以及精子形态等指标,筛选出18例单一因素少精子症患者(浓度＜ 15×106/ml,其余指标均正常)和20例单一因素弱精子症患者(前向运动精子百分率＜32％,其余指标均正常)用于DNA甲基化检测；提取精子样本全基因组DNA,进行亚硫酸氢盐处理、PCR扩增目的基因片段并测序；通过BIQ Analyzer软件对测序结果进行质控和DNA甲基化程度分析.20例正常生育男性精液标本作为对照组. 结果:与对照组甲基化丢失率[(0.30±0.06)％]相比,少精子症患者的H19印记控制区域的DNA甲基化丢失程度显著增高[(9.19±2.45)％],尤其当精子浓度＜3×106/ml时,差异达到极显著水平(P＜0.0l).在弱精子症患者中H19印记控制区域的DNA甲基化丢失程度[(0.30±0.07)％]和模式均与对照组无显著差异(P=0.62).进一步重点分析了CTCF6位点的DNA甲基化状态,少精子症患者的DNA甲基化丢失程度[(2.67±0.75)％]显著高于对照组[(0.05±0.03)％]和弱精子症组[(0.03±0.02)％],而后两者之间无显著差异(P=0.35). 结论:H19印记控制区域的DNA甲基化程度的降低与少精子症密切相关,且降低程度与精子浓度呈显著负相关,而与精子活力无关.
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印记基因H19在不同质量精子和胚胎中的甲基化状态
目的 对印记基因H19在三种不同质量的精子中的甲基化状态以及精卵结合后形成胚胎的甲基化状态进行比较,初步探索精子甲基化状态与受精后胚胎甲基化状态的关系.方法 收集在云南省第一人民医院生殖医学科行IVF－ET治疗中废弃的精子91份和D3期低质量胚胎171份,依据WHO第5版根据精子参数将精子样本分为3组,分别分析3组的精子及受精后胚胎H19的甲基化状态.结果 B组在精子中和胚胎中H19甲基化状态异常比例显著高于另外2组(P＜0.05).结论 印记基因H19甲基化状态异常主要集中在异常参数精子组中,提示其异常状态与精子质量降低有关;通过IVF、ICSI受精后的胚胎都出现同等比例的异常状态,没有显著差异;异常精子的胚胎未出现异常,这可能与胚胎自身的自我修复功能有关;而个别正常精子受精后的胚胎出现甲基化印记异常的原因可能与体外培养条件有关,也有可能与卵子质量本身有关.
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脐血胰岛素样生长因子-2和印记基因H19与胎儿生长受限的关系
目的 探讨脐血胰岛素样生长因子-2(IGF-2)和H19印记状态与胎儿生长受限(FGR)的关系.方法 采用放射免疫法测定42例FGR孕妇(研究组)和晚期正常妊娠妇女30例(对照组)脐血中IGF-2水平,同时采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术,检测胎盘组织中H19基因印记状态.结果 ①研究组脐血IGF-2水平为(1.52±0.20)μg/L,明显低于对照组的(1.97±0.21)μg/L(P＜0.05).②研究组中杂合子20例,其中9例双等位基因表达;对照组中杂合子14例,均为单等位基因表达;研究组H19基因印记丢失明显高于对照组(P＜0.05).③研究组H19双等位基因表达的病例脐血IGF-2水平均明显低于H19杂合性丢失和H19单等位基因表达病例(P＜0.05);H19杂合性丢失和H19单等位基因表达病例脐血IGF-2水平无显著性差异.结论 妊娠晚期IGF-2减低是导致FGR发生的原因之一;H19基因印记丢失下调IGF-2基因间接影响胎儿生长发育.
关键词： 胰岛素样生长因子-2 印记基因H19 胎儿生长受限
