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聚酰胺-胺型纳米载体在基因治疗中的应用
高效、安全和靶向的载体系统是基因治疗成功的关键.病毒载体系统因毒性、免疫原性等安全隐患,其临床应用受到很大限制;而非病毒载体系统转染效率一直不如前者.近年来出现的纳米微粒基因转移技术有可能突破这一窘境,使基因治疗成为临床常规治疗手段.
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眼科疾病联合基因治疗的研究现状
联合基因治疗是当前多基因遗传性疾病治疗研究的热门策略,正逐渐形成一套较完整的技术理论体系.在单基因治疗研究的基础上选择一些有协同作用的基因联合治疗,取得更好疗效.在眼科,联合基因治疗遗传性视网膜色素变性、眼部新生血管性疾病、青光眼等已得到初步研究结果.本文综述了联合基因治疗的概念、优势、构建联合基因的方法、基因载体的选用以及相关实验操作,以及现阶段国内外的研究现状.
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脂质-鱼精蛋白-DNA复合物的构建及其对细胞的体外转染
目的研究新型非病毒载体脂质-聚阳离子-DNA(LPD)复合物的制备方法及其对体外细胞的转染率.方法用薄膜-挤压法制备空白阳离子脂质体,与鱼精蛋白-DNA复合物在室温孵育后,得到LPD;用透射电镜观察其形态,用激光粒度仪测定其粒径和zeta电位;LPD与DNA酶I溶液在37℃下孵育不同时间后,用琼脂糖凝胶电泳观察其降解情况;用荧光法测定其包封率;用X-gal染色法考察了LPD对张氏(Chang)肝细胞,HepG2肝癌细胞和SMMC-7721肝癌细胞的转染率.结果LPD的形态近似于球体,平均粒径为143.5 nm,平均zeta电位为+32.6 mV;37℃下核酸酶作用2 h后,LPD中的DNA几乎无降解;平均包封率为93.42%;LPD对张氏(Chang)肝细胞、HepG2肝癌细胞和SMMC-7721肝癌细胞的转染率分别为(69±6)%,(43±7)%和(96.2±1.8)%.结论LPD是一种制备工艺简单、体外稳定性好、转染率高,具有应用潜力的非病毒载体系统.
关键词: 非病毒载体系统 脂质-鱼精蛋白-DNA复合物 转染率 -
脂质体-聚乙烯亚胺-DNA三元复合物的构建及其对细胞的体外转染
目的 研究非病毒基因栽体脂质体-聚乙烯亚胺(PEI)-DNA三元复合物(TC)的制备方法,评价其体外细胞学性质.方法 采用乙醇注入法制备空白阴离子脂质体,与PEL/DNA复合物37℃孵育30 min后,得到TC,考察其理化性质、抗核酸酶降解能力、血浆稳定性、细胞毒性及在卵巢癌细胞(Hela)中的转染效率.结果 制备的TC呈类球形,大小较均匀,平均粒径为234.5 nm,Zeta电位为-20.72 mV;TC能在血浆中稳定存在4 h而不发生聚集;与核酸酶作用2 h后,其中的DNA几乎无降解;其细胞毒性较低,在无血清和含血清培养基中均能成功的转染Hela细胞,在舍血清培养基中其转染效率明显高于PEI/DNA复合物.结论 TC是一种制备工艺简单、血浆稳定性好、转染率较高、极具应用潜力的非病毒纳米基因载体.
关键词: 非病毒载体系统 脂质体-聚乙烯亚胺-DNA三元复合物 稳定性 转染效率 -
慢性疼痛基因治疗非病毒递送系统研究进展
慢性疼痛基因治疗的有效性和安全性的关键问题是要找到合适的目的基因和能将目的基因送入靶组织或靶器官的载体系统.目前慢性疼痛基因治疗中常用的有反义寡核普酸(antisenseoligonueleotide,asODN)技术和RNA干扰(RNAi)[1]技术,而这些技术成功的运用有赖于靶向、高效的载体系统.因此积极发展新型高效、特异性强的靶向载体系统是基因治疗研究的重点.载体系统主要分为病毒载体系统和非病毒载体系统两大类.由于病毒载体的安全性问题,现在更注重于非病毒载体递送系统的研究,现就非病毒载体递送系统这这几年取得了一些进展进行综述.