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以细胞凋亡指数为指标研究视网膜神经元细胞损伤中存在的问题
笔者在近几年的审稿、研究生学位论文答辩和文献阅读中,注意到在部分涉及以细胞凋亡和细胞凋亡指数为指标,评价视网膜神经元细胞受损伤情况的基础研究工作,尤其以末端核苷酸转移酶介导的生物素dUTP切口末端标记(TDT-mediated biotinylated-dUTP nick-end labeling,TUNEL)技术原位观察细胞凋亡和以此为基础计算细胞凋亡指数的研究工作中,存在一些明显且原则性的问题,集中表现为TUNEL技术的显色结果图片质量较低,无法反映细胞凋亡概念中所述的基本表现,由此计算的细胞凋亡指数缺乏准确性和可重复性。
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细菌16S rDNA基因T碱基特异的PCR产物片段化
目的探讨细菌16S rDNA检测芯片杂交前的样本处理优化方法.方法设计针对细菌16S rDNA基因全长的通用引物,通过PCR时掺入一定比例的dUTP替代dTTP,扩增长度为1.5 kb的片段,用尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)消化处理掺入到双链上的dUTP后,再经浓氨水特异性断开DNA双链上原dUTP处的磷酸二酯键,然后用聚丙烯酰胺凝受胶电泳(PAGE)和琼脂糖电泳确认片段化的效果.结果本实验选用的基因当dUTP与dTTP的比例在3∶7~1∶1时,都能够获得比较理想的片段化结果.结论通过控制一定的dUTP掺入比例再经UDG及氨水处理能够得到稳定的片段化结果.