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牙龈卟啉单胞菌HA2基因与牙周病关系的研究
目的 利用PCR及RT-PCR检测慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)HA2的DNA和RNA水平,探讨其分布规律及与牙周病的关系.方法 12例慢性牙周炎患者共采集36个龈下菌斑标本,记录临床指标(探诊深度、临床附着水平、牙龈指数、菌斑指数、龈沟出血指数),PCR及RTPCR扩增龈下菌斑标本中的P.g HA2基因,扩增产物经琼脂糖电泳、拍照,应用计算机软件GeneTools扫描并计量其中的相对核酸含量.结果 P.g HA2在DNA水平上的检出率为92%,在RNA水平上的检出率为86%.P.g HA2的DNA水平与探诊深度及牙龈指数之间存在正相关关系(P＜0.01);P.g HA2的RNA水平与牙龈指数之间存在正相关关系(P＜0.05).结论 P.g HA2基因广泛存在于慢性牙周炎患者的龈下菌斑中,且P.g HA2在DNA和RNA水平上与牙周状态关系密切,提示P.g HA2可能是P.g致病因子之一.
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以HA2为基础的流感病毒候选疫苗同时与H5N1、H1N1和H3N2亚型毒株产生交叉反应
[目的]探讨以流感病毒(IAV)血凝素蛋白茎部(HA2)保守表位为免疫原来诱导针对不同血清型流感病毒的广谱体液免疫应答.[方法]我们构建了一个重组的IAV疫苗IR30-Fd,由A/Viet Nam/1203/2004 (H5N1)病毒株HA2的30个保守的氨基酸残基(IR30)和一个连在碳端的三聚体基序(foldon,Fd)组成.原核表达该蛋白,圆二色谱和Western Blot验证IR-30-Fd的室间结构之后,分别免疫BALB/c小鼠和新西兰白兔,并同时免疫IR30多肽为对照,制备血清抗体.然后应用ELISA和Western Blot方法检测抗体的滴度,应用细胞ELISA和Western Blot方法检测抗体与不同的IAV菌株HA2蛋白的交叉反应性.[结果]IR30-Fd能够形成具有α螺旋的三聚体空间结构.用IR30-Fd和IR30免疫BALB/c小鼠和新西兰白兔后获得了高效价的抗IR30的特异性抗体.鼠抗IR30-Fd抗体能与H3N2和H1N1的HA蛋白反应而鼠抗IR30抗体不能.鼠抗IR30-Fd抗体稀释6 400倍、兔抗IR30-Fd抗体稀释8.2×105倍均可以与H5N1的HA蛋白反应.细胞ELISA表明兔抗IR30-Fd抗体与天然状态下的H5N1和H3N2的HA蛋白的结合亲和力高于兔抗IR30抗体.[结论]本研究结果表明IR30-Fd蛋白能够模拟H5N1 HA2蛋白保守序列的天然三聚体结构,并且能够诱导产生针对H5N1H1N1和H3N2亚型HA蛋白的广谱交叉反应抗体,为研制通用的流感病毒疫苗提供了结构基础.
