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外源性TGFβ3细胞因子对培养腭突IRF6基因沉默的拮抗作用
目的 研究外源性TGFβ3对IRF6基因表达下调后腭突发育融合的影响,并探讨其分子机制.方法 取GD13.5天的胚胎腭突,进行腭突器官培养后进行IRF6基因沉默,并随机分为对照组和实验组.实验组在培养24h后分别添加10 ng/ml、50 ng/ml、80 ng/ml和100ng/ml TGFβ3细胞因子,对照组未添加TGFβ3细胞因子.应用HE染色观察腭突融合,荧光Real-Time PCR检测IRF6 RNA表达的变化,Western blot检测IRF6蛋白的表达变化.结果 RT-PCR和Western blot显示对照组及10ng/mlTGFβ3实验组对IRF6基因表达几乎没有影响,腭突中嵴上皮持续存在,腭突未融合.50ng/ml、80ng/ml及100ng/ml TGFβ3组的IRF6 mRNA及蛋白表达随TGFβ3剂量增加而增加.50、80和100ng/ml TGFβ3实验组腭突中嵴上皮完全消失,两侧腭突融合.结论 TGFβ3与IRF6存在正向调控作用,TGFβ3可逆转IRF6沉默导致的腭裂.
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中国南方人群TGFβ3和ARNT2基因多态性与非综合征性唇腭裂的关联研究
目的 探讨TGFβ3和ARNT2基因与非综合征性唇腭裂发生的关系.方法 收集了2006～2010年的119个中国南方非综合征性唇腭裂核心家系作为研究对象,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测TGFβ3基因的多态位点rs2300607和rs2268625,以及ARNT2基因的多态位点rs2228099和rs3768017,并进行传递不平衡检验(TDT)和基于核心家系的关联分析(FBAT).结果 TDT分析结果显示:TGFβ3基因中的rs2268625位点在唇裂合并腭裂核心家系中,存在传递不平衡(P=0.02).FBAT分析结果显示:ARNT2基因中rs2228099/rs3768017构成的CT和GG基因型与子代唇腭裂发生危险性增加有显著关联(P=0.008、0.012).结论 在我国南方人群中,TGFβ3基因和ARNT2基因多态性与非综合征性唇腭裂存在关联.
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BMP2和TGFβ3双基因真核表达载体的构建
[目的]构建骨形态发生蛋白BMP2和转化生长因子TGFβ3双基因真核表达载体.[方法]从人胚胎组织提取总RNA,反转录成cDNA,以pGEMT/BMP2和反转录的cDNA为模板,PCR扩增出BMP2和TGFβ3两个基因全长,将两个基因片段分别定向连入双基因真核表达载体pIRES;用酶切的方法筛选出阳性重组质粒,并进行测序鉴定.[结果]酶切鉴定证明已将BMP2和TGFβ3两个基因连入载体中,测序结果完全正确.[结论]成功构建pIRESBMP2/TGFβ3双基因真核表达载体.
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骨巨细胞瘤微血管生成及转化生长因子β1和β3的表达与预后关系
目的:研究骨巨细胞瘤微血管生成能力及意义,并探讨各种细胞的不同来源和功能.方法:用LSAB法检测骨巨细胞瘤病理标本微血管密度(MVD)和特征及TGFβ1和TGFβ3表达.结果:病理分级之间MVD:Ⅲ级＞Ⅱ级(P＜0.05),Ⅲ级＞Ⅰ级(P＜0.01),瘤组织分化越差,微血管异质性越强.TGFβ1表达与MVD增加显著相关(P＜0.01),与术后复发等不良预后相关(P＜0.05).TGFβ3表达与病理分级相关,而与微血管密度无关(P＜0.05),与外科分期有关(P＜0.05),与术后复发等不良预后有关(P＜0.05).TGFβ1与TGFβ3阳性表达相关(P＜0.05),其表达率之间有显著差异(P＜0.01).结论:MVD、TGFβ1和TGFβ3阳性表达可作为骨巨细胞瘤不良预后的指标.FC可能是真正瘤细胞,MGC和MC可能是瘤细胞分泌细胞因子趋化而来的破骨细胞和前体破骨细胞.
