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果蝇裸露角蛋白2对大鼠牙囊细胞成骨向分化的调控机制研究
目的:研究体外果蝇裸露角蛋白2(naked cuticle homolog 2,Nkd2)对大鼠牙囊细胞(rat dental follicle cells,rDFCs)成骨向分化的调控机制.方法:体外培养rDFCs,鉴定其组织来源并进行成骨向分化诱导,茜素红染色验证其成骨向分化能力,激光共聚焦检测检测Nkd2在中rDFCs的表达;采用小RNA干扰技术,干扰rDFCs中的Nkd2表达后进行成骨向分化诱导,western blot检测小RNA干扰对rDFCs表达成骨向分化因子Runx2、Col-1和OCN的影响;免疫荧光染色检测3-catenin在rDFCs中的分布变化,western blot检测小RNA干扰对rDFCs表达蓬乱蛋白1(Dishevelled-1,Dvl-1)的表达变化和Wnt/β-catenin信号通路激活剂Wnt3a与阻断剂FH535处理rDFCs后Nkd2的表达改变.结果:获得体外培养的rDFCs,并成功诱导其成骨向分化,茜素红染色显示矿化结节形成.Nkd2在rDFCs中的表达主要分布于胞浆和胞核周围.Nkd2小RNA干扰后的rDFCs中Runx2、Col-1蛋白表达明显下调,Dvl-1的表达下调.同时,Wnt3a处理组rDFCs中Nkd2蛋白表达量升高,而FH535处理组的表达量下降.结论:Nkd2通过Dvl-1调控Wnt/β-catenin信号通路促进rDFCs的成骨向分化;Nkd2是Wnt/β-catenin信号通路的靶基因,对Wnt/β-catenin信号通路起正反馈调节作用.
关键词： Nkd2 牙囊细胞 成骨向分化 Wnt/β-catenin信号通路 -
姜黄素对结肠癌细胞株NKD2及CXCR4基因表达影响的研究
[目的]观察姜黄素对SW620细胞及裸鼠NKD2、CXCR4表达水平的影响.[方法]通过MTS检测姜黄素对SW620细胞活性的影响;运用Western blot、Real-time qPCR检测不同浓度姜黄素对SW620细胞及转染NKD2siRNA后SW620细胞内NKD2、CXCR4蛋白和mRNA表达的影响.雄性BALB/c裸鼠8只,随机分成对照组与姜黄素组,每组4只.采用皮下接种SW620细胞.造模后第7d开始给对照组与姜黄素组分别注射对照液和100mg/kg·d浓度的姜黄素悬液,连续用药14d.给药后检测瘤体体积,通过Real-time qPCR检测瘤体组织内NKD2及CXCR4表达水平.[结果]姜黄素能明显抑制SW620细胞的增殖活性,显著性上调SW620细胞内NKD2表达及下调CXCR4的表达,且呈剂量依赖性.转染后发现能上调姜黄素处理后的肿瘤细胞CXCR4的表达水平.体内实验表明姜黄素抑瘤率为30.69％.通过qPCR发现瘤体组织中NKD2的表达量增加,CXCR4的表达量显著性降低.[结论]姜黄素均能从体内外明显抑制结肠癌细胞SW620的生长,其作用机制可能通过上调抑制基因NKD2的表达,抑制Wnt信号通路,进而下调肿瘤细胞CXCR4表达,从而起到抑制肿瘤侵袭转移的作用.
关键词： 姜黄素 SW620结肠癌细胞 Nkd2 CXCR4 -
姜黄素对结肠癌氟尿嘧啶耐药细胞株中NKD2和TET1的调控作用
[目的]通过体外实验观察姜黄素对5-Fu耐药细胞株(5FUR)中NKD2、TET1及Caspase-3表达水平的影响.[方法]运用Western blot、Real-time qPCR检测不同浓度姜黄素对5FUR细胞及转染TETl shRNA后5FUR细胞内NKD2、Caspase-3蛋白和mRNA表达的影响.通过重亚硫酸测序(BSP)的方法,观察姜黄素对NKD2基因启动子去甲基化的干预情况.[结果]经过5-Fu培养而得到5FUR的IC50为(86.91±3.61) μg/ml (P＜0.001).HCT-116原代细胞5-Fu的IC50为(12.64±1.52) μg/ml,姜黄素对其增殖的抑制率为38.34％ (P＜0.001),姜黄素能显著上调5FUR细胞内NKD2、TET1的表达,且呈剂量依赖性.TET1转染敲低后检测发现5FUR细胞中的NKD2及Caspase-3的表达受到明显的抑制.[结论]姜黄素能从体外明显抑制结肠癌细胞5FUR的生长,其作用机制可能通过去甲基化调控蛋白TET1促使抑制基因NKD2基因启动子发生去甲基化,从而上调NKD2的表达,终起到抑制肿瘤生长的作用.
关键词： 姜黄素 5-Fu耐药细胞株(5FUR) Nkd2 TET1 Caspase-3
