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炎症微环境作用下经典及非经典Wnt通路平衡对牙周膜干细胞成骨分化的调控作用
目的 探讨炎症微环境作用下经典Wnt/β-联蛋白(β-catenin)与非经典Wnt/Ca2+通路的平衡对牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSC)成骨分化的调控作用.方法 收集解放军总医院口腔科2015年3至6月因治疗需要拔除的前磨牙和第三磨牙8颗及慢性牙周炎牙齿8颗,培养慢性炎症组织来源的PDLSC (PDLSC from patients diagnosed as periodontitis,P-PDLSC)与正常组织来源的PDLSC (PDLSC obtained from a healthy microenvironment,H-PDLSC).RNA干扰转染β-联蛋白至H/P-PDLSC,观察细胞状态并用蛋白质印迹法检测转染效果.实时定量PCR技术检测转染后Runt相关转录因子2 (Runt-related transcription factor 2,Runx2)、β-联蛋白及Nemo样激酶(nemo like kinase,NLK) mRNA表达.成骨诱导3d后蛋白质印迹法检测Ca2+/钙调素依赖型蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)和NLK的表达,免疫荧光检测CaMKⅡ的表达.结果 蛋白质印迹法检测RNA干扰24 h抑制H/P-PDLSC siRNA β-联蛋白转染组中β-联蛋白的表达.成骨诱导3d后实时定量PCR结果显示,P-PDLSC siRNA β-联蛋白组Runx2(4.553±0.659)显著高于P-PDLSC空质粒转染组(1.918±0.315)(P=0.000),NLK mRNA表达(7.341±1.331)亦显著高于空质粒转染组(5.664±0.792)(P=0.030);与之相应的是蛋白质印迹法检测P-PDLSC siRNA β-联蛋白组与P-PDLSC空质粒转染组相比CaMKⅡ、NLK蛋白表达水平上升.免疫荧光检测结果显示,成骨诱导后H-PDLSC及P-PDLSC siRNA β-联蛋白组CaMKⅡ表达增强且高于H/P-PDLSC空质粒转染组.结论 炎症微环境作用下经典/非经典Wnt通路在PDLSC成骨分化过程中均发挥重要作用,抑制β-联蛋白可增强非经典Wnt/Ca2+通路,促进干细胞的成骨分化.
