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原位杂交检测增生和癌变前列腺组织中前列腺分泌蛋白94 mRNA的表达
根据前列腺分泌蛋白94(PSP94)和PSP57的基因结构特点,设计并合成了以地高辛标记的两条探针,利用组织原位杂交的方法,对增生和癌变前列腺组织中PSP94 mRNA的表达量进行了比较. 结果显示, 20例增生前列腺组织,有10例PSP94和PSP57共同探针的杂交信号比PSP94特异探针杂交信号强,10例相反.它们的共同点是均以腺体增生为主.而7例前列腺癌组织中除1例外,其余6例PSP94特异探针的杂交信号均比PSP94和PSP57共同探针的杂交信号强.增生和癌变前列腺组织杂交结果比较,癌变前列腺组织PSP94特异探针杂交信号均比增生前列腺组织强.
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正常人前列腺组织PSP mRNA的表达
用RT-PCR和cDNA序列测定法分析5名正常中国人前列腺组织中前列腺分泌蛋白(PSP)mRNA的表达.结果表明,在这5名正常前列腺组织中均同时存在PSP94和PSP57 cDNA,且基因序列与文献报道的从前列腺癌和增生前列腺组织中获得的完全一致.这可能对PSP进一步的基础研究和应用有一定的意义.
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PSP57不是增生和癌变前列腺组织PSP94 mRNA可变剪切特有的产物
目的:比较人正常、增生和癌变前列腺组织中 PSP94 和 PSP57 mRNA的表达情况.方法:提取事故死亡的正常成年人前列腺组织及手术得到的增生和前列腺癌组织总RNA,进行RT-PCR,其产物分别以 PSP94 和 PSP57 共有的外显子及 PSP94 外显子Ⅲ作探针进行Southern blotting分析;RT-PCR产物经克隆后进行序列测定.结果:三种前列腺组织中均有 PSP94 和 PSP57 mRNA的表达;人正常前列腺组织中的 PSP94 及 PSP57 的基因序列与增生前列腺组织和癌变前列腺组织中的完全一致.结论:PSP57 不是增生和癌变前列腺组织中 PSP94 mRNA可变剪切特有的产物.
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金黄地鼠前列腺分泌蛋白对输卵管液糖蛋白的影响
目的:在整体水平探讨前列腺分泌蛋白对金黄地鼠输卵管液中糖蛋白的影响.方法:金黄地鼠雄鼠依据手术方式的不同分为3组,分别为假手术组(SH)、附属性腺全去组(TX)和腹前列腺组(VP)(仅存前列腺).收集与各手术组交配后不同时间点(交配后0.5、2、4、6 h)的输卵管液(每一时间点及每一组,n=3),输卵管液蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,考马斯亮蓝或阿仙蓝染色分析,应用蛋白电泳印迹后与系列某一种特异性糖基专一性结合凝集素反应,分析糖蛋白的变化.结果:不同组雄鼠交配及不同时间点收集输卵管液蛋白电泳谱类似,约15条主要条带.凝集素结合谱示,麦胚凝集素(WGA)结合的相对分子质量(Mr)为32 000、35 500、47 000、52 000糖蛋白见于6 h VP组输卵管液,而6 h TX组可见Mr为81 000、128 000条带;与豌豆凝集素(PSA)结合Mr为37 500、32 000糖蛋白仅见于6 h VP组,而6 h TX组缺乏;仅6 h VP组可见与双花扁豆凝集素(DBA)结合Mr为52 000、47 000糖蛋白,而6 h TX组缺乏.而0.5、2、4 h时间点收集的输卵管液各凝集素结合谱相似.结论:前列腺分泌蛋白可影响修饰交配6 h后的输卵管液中含乙酰氨基葡萄糖、N-乙酰半乳糖胺/半乳糖和甘露糖糖链的糖蛋白.这些糖蛋白可能在胚胎的发育过程中起作用.
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前列腺精子结合蛋白的二维凝胶电泳及质谱分析
[目的]应用精子膜蛋白亲和层析柱分离金黄地鼠前列腺精子结合蛋白,并用二维电泳和质谱对金黄地鼠前列腺精子膜结合蛋白进行初步分析.[方法]应用附睾精子膜亲和层析柱纯化前列腺精子结合蛋白,采用二维凝胶电泳对纯化的前列腺精子膜结合蛋白进行蛋白分离和图像分析,并结合基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析及数据库搜索从而鉴定部分蛋白质斑点;RT-PCR检测已鉴定蛋白在前列腺及未受精卵子中的mRNA的表达.[结果]附睾精子膜蛋白亲和层析柱可纯化出前列腺结合蛋白,前列腺附睾精子膜蛋白结合蛋白的二维凝胶电泳蛋白图谱.分离的蛋白质斑点为30个,质谱鉴定出2个蛋白点,一为热休克蛋白105,另一羰基还原酶(NADPH)-3.前列腺和未受精卵中均表达热休克蛋白105和羰基还原酶-3的mRNA.[结论]自前列腺分泌物中分离出精子膜结合蛋白,金黄地鼠前列腺中精子结合蛋白经双向电泳及飞行质谱分析鉴定出蛋白热休克蛋白和羰基还原酶.
