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H7 N9流感病毒文献资料
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H7 N9流感病毒血凝素HA在毕赤酵母中的表达及免疫原性分析
目的：利用毕赤酵母表达制备H7N9流感病毒血凝素[HA 1～525个氨基酸（aa）]，并对其免疫原性进行研究。方法经全基因合成获得H7N9流感病毒[A／Hangzhou／1／2013（H7N9）]全长HA，以其为模板，PCR得到片段HA1－525，通过NspⅤ和NotⅠ双酶切连入pPICZαA载体，转入毕赤酵母X33，ELISA筛选阳性克隆。发酵培养后，表达上清经PEG20000沉淀获取HA1－525，并用糖苷内切酶H（ endo H）酶切分析其N-糖链。将制备的HA1－525免疫BALB／c小鼠，经ELISA检测特异性HA7抗体滴度，红细胞凝集抑制实验分析血抑活性。结果培养上清用抗HA7抗体经ELISA检测，重组菌成功表达HA7，且Western印迹检测发现有特异性弥散条带，经endo H 酶切后， HA1－525为均一条带，相对分子质量约58×103，与理论大小相当，表明HA1－525存在甘露糖基化结构。 HA1－525两次免疫小鼠后可产生1∶36000的抗体滴度。以H7N9裂解苗为抗原，检测其血抑活性为1∶700。结论利用毕赤酵母表达的H7N9流感病毒HA1－525可以诱导小鼠产生针对HA7的中和抗体。
