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大肠杆菌细菌菌蜕的制备及初步研究
目的:利用温度控制噬菌体PhiX174裂解基因E的表达,制备大肠杆菌细菌菌蜕,鉴定其裂解效率并观察其形态.方法:利用PCR技术扩增分离了噬菌体PhiX174裂解基因E并构建其表达质粒,并将质粒转化大肠杆菌DH5α构建工程菌.工程菌培养温度从28℃突升至42℃,每15 min检测菌液D600值,诱导后4 h收集菌体.体外菌落计数计算裂解效率,并通过电镜观察菌蜕结构.结果:获得273 bp的PhiX174裂解基因E全长基因及表达质粒.菌液D600在温度突升至42℃后30 min开始持续下降,2 h后基本维持不变.4 h后收集菌体测得裂解效率为99.99%.电镜观察菌蜕为具有完整外膜结构的细菌空壳,并且无细胞毒性.结论:本研究成功利用噬菌体PhiX174裂解基因E实现了大肠杆菌细菌菌蜕的制备,为进一步的疫苗及递送系统研究奠定了基础.
关键词： 大肠杆菌 细菌菌蜕 噬菌体PhiX174裂解基因E 温度控制 -
细菌菌蜕的研究进展
细菌菌蜕是革兰阴性细菌被噬菌体PhiX174的裂解基因E裂解后形成的完整细菌空壳.细菌菌蜕兼顾了组合抗原免疫原性、佐剂效应、靶向性载体的作用,特别适合于黏膜免疫及口服免疫;由于缺乏内含物而更加安全;生产过程简单,适宜大规模生产.这些特性决定了细菌菌蜕是一种具有良好应用前景的候选疫苗及递送系统.本文就细菌菌蜕的研究进展作一综述.
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人伤寒沙门菌Ty21a菌蜕的制备
目的 探讨利用噬菌体PhiX174 E基因制备人伤寒沙门菌Ty21a菌蜕的可行性以及适当制备条件.方法 将PhiX174 E基因克隆至温控表达系统,筛选获得裂解效率较高的质粒pMBE,通过优化转化方法 将pMBE导入Ty21a,利用温控表达系统进行Ty21a菌蜕制备.菌落计数计算菌蜕裂解效率,并通过扫描电镜和透射电镜观察其形态结构.结果 裂解质粒pMBE介导大肠杆菌DH5α的裂解效率达99.99%;通过电击转化方法 获得重组Ty21a(pMBE),利用温控表达系统成功制备Ty21a菌蜕,裂解效率达96.77%.电镜观察菌蜕结构完整并呈空泡状结构,并能看到溶菌孔道.结论 PhiX174 E基因表达可实现人伤寒沙门菌Ty21a裂解形成Ty21a菌蜕,为其作为疫苗和药物递送载体的研究奠定了基础.
关键词： Ty21a菌 细菌菌蜕 电击转化 噬菌体PhiX174 E基因
