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用液相色谱-串联质谱法检测人尿中三种普坦类兴奋剂控制药物
目的:建立使用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)同时测定尿样中三种普坦类药物(托伐普坦、考尼伐坦和利希普坦)的方法.方法:样品用5％乙酸铅水溶液沉淀蛋白质并离心后,在电喷雾正离子模式下,以多反应监测(MRM)方式采集数据进行定性和定量分析.结果:托伐普坦、考尼伐坦、利希普坦的低检测限(LOD)分别为15 ng/mL、1 ng/mL和2 ng/mL,线性范围(r2＞ 0.99)分别为45～3000、3～2000和6～400ng/mL.3种药物在低、中、高3个浓度水平下,日内变异系数均小于8.2％,日间变异系数均小于13.6％,检测的准确度大于90％.结论:该方法具有样品前处理简单、检测快捷、灵敏度高、重现性好、定性定量准确等特点,已用于我们实验室的兴奋剂控制样品常规检测中.
关键词： 兴奋剂控制 托伐普坦 考尼伐坦 利希普坦 高效液相色谱-串联质谱 -
考尼伐坦抑制精氨酸血管加压素诱导的心脏成纤维细胞增殖及胶原表达
目的 探讨大鼠心脏成纤维细胞(CFs)经精氨酸血管加压素(AVP)及其受体拮抗剂考尼伐坦(CON)干预后,细胞的增殖和细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的变化.方法 采用胶原酶Ⅱ消化法、差速贴壁法、差速脱壁法获取并纯化CFs,应用CCK-8活细胞计数试剂盒检测细胞活性,RT-PCR方法检测细胞中Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1 A1)和Ⅲ型胶原蛋白α1链(COL3A1) mRNA的变化,Western blot法检测COL1A1、COL3A1蛋白表达的变化.结果 干预培养的CFs 24 h后,10-7 mol/LAVP可显著促进CFs细胞增殖(P＜0.01),而10-7 mol/L CON可显著抑制这一作用(P＜0.01).干预培养的CFs 12 h后,10-7moL/L AVP可诱导CFs COL1A1、COL3A1 mRNA表达显著增加,同时蛋白表达亦显著增加,而10-7 mol/L的CON可抑制这些作用.结论 AVP可促进CFs的细胞增殖和COL1A1、COL3A1 mRNA和蛋白表达,而CON可部分抑制这种作用.
