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兴奋剂检测中吗啡和可待因的LC-MS/MS定量方法研究
目的:建立WADA禁用清单中阈值物质吗啡及相关物质可待因的HPLC-MS/MS定量方法并进行方法验证.方法:尿样加内标后,加入磷酸盐缓冲液(0.1 mol/L Na2HPO4和0.1 mol/LNaH2PO4水溶液pH=6.8)及β-Glucuranidase水解过夜,加入固体缓冲剂(NaHCO3/K2CO3=3/2,w/w,pH=9.5)和提取液(乙醚/异丙醇=9/1,v/v)萃取,有机相于氮气流下吹干,用初始流动相定容后进样于LC/MS/MS.使用耐受高pH值的Waters XBridgeTM C 18色谱柱,以乙腈/氨水(pH≈10)作为流动相体系,使用乙腈的起始浓度为2％,终浓度为98％,运行时间为10min的梯度洗脱条件,采用多反应离子监测正离子模式,以286→201 (morphine),300→171 (codeine),289→165 (morphine-D3)为定量离子.结果:吗啡和可待因在尿中的定量限分别为0.05μg/mL和0.005 μg/mL,线性范围分别为(r2 ＞0.99)0.10～10 μg/mL和0.05～10 μg/mL,吗啡定量的日内精密度和日间精密度(CV)分别为2.64％和4.01％,可待因为2.22％和2.01％.吗啡和可待因在1.0 μg/mL浓度时的方法回收率分别为98.47±2.73％和99.41±4.12％.定量检测误差均低于5％.结论:本方法使用一个步骤同时测定尿中禁用物质morphine的总量,并可同时定量检测尿样中的codeine,数据处理简单;简化了前处理操作步骤,定量结果的精密度得到了提高;采用BridgeTM C 18色谱柱和高pH值流动相,改善了morphine在普通C18柱上不保留、仪器响应和保留时间重现性较差、峰形拖尾较为严重的问题.方法重现性好,测量结果准确可靠,满足WADA技术文件的要求,应用于本实验室常规检测和WADA的外部质量评估计划,效果良好.
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液相色谱-串联质谱直接进样法测定人尿中的沙丁胺醇
沙丁胺醇(salbutamol)为世界反兴奋剂机构(WADA)颁布的《禁用清单》中的阈值物质,兴奋剂检测工作需要对其进行定量测定.尿样加入内标后用5％醋酸铅溶液沉淀蛋白并稀释尿样,无需其它前处理步骤,直接进样于高效液相-串联质谱仪(HPLC-MS/MS)进行分析,使用ZORBAX SB-aq柱进行分离,使用多反应监测(MRM)模式进行测定,建立了阈值物质沙丁胺醇的定量检测方法并进行了方法验证.尿中定量限为0.02 μg/ml,线性范围(r2＞0.99)为0.02～10 μg/ml,实验的日内精密度和日间精密度(CV)分别为2.67％和3.02％,测量不确定度为5.36％.阈值浓度时的定量偏差均小于10％.尿样无需水解和提取,操作简单,结果准确.该方法可应用于常规检测和WADA外部质量评估计划.
