首页 > 文献资料
-
裂片核素内照射诱导大鼠外周血淋巴细胞DNA单链断裂
目的探讨混合裂变产物致癌的分子机理和混合裂变产物内污染诱发免疫细胞的放射免疫毒理效应.方法应用碱性单细胞凝胶电泳技术观察了混合裂变产物急性染毒时对大鼠外周血淋巴细胞DNA的损伤.结果裂片核素内照射对大鼠外周血淋巴细胞DNA具有明显的损伤作用,慧星细胞率和DNA的损伤程度随染毒时间的延长、累积剂量增大而逐渐加重,且存在较好的剂量-效应关系.结论单细胞凝胶电泳技术检测的DNA单链断裂可作为毒物对健康影响的早期生物学指标.
-
碱性单细胞凝胶电泳技术用于淋巴细胞辐射生物剂量估算初探
目的 初步探索碱性单细胞凝胶电泳(SCGE)方法用于电离辐射生物剂量估算的可行性.方法 不同剂量水平(0～5 Gy)的60Co γ射线照射正常人外周血,用碱性SCGE分析淋巴细胞"彗星"尾长和尾矩,建立各自的剂量-效应曲线.收集某基地放射工作从业人员的外周血进行碱性SCGE分析,并估算受照剂量,与监测物理剂量相比较.结果 淋巴细胞"彗星"尾长和尾矩均随着照射剂量的增加而增加,其剂量-效应曲线均为线性平方模式.以"彗星"尾长为指标的剂量-效应曲线方程为Y=13.59+20.87X-2.27X2,以尾矩为指标的曲线方程为Y=8.50+15.04X-1.43X2.参照上述方程,以尾矩为指标估算放射工作从业人员的剂量更接近实际受照剂量.结论 用碱性SCGE分析淋巴细胞"彗星"尾矩有希望成为电离辐射生物剂量计.
-
焦化作业工人淋巴细胞HSP70表达及作用
目的 探讨热应激蛋白70(HSP70)在焦炉工人外周血淋巴细胞的表达水平及其意义.方法 用微核试验和碱性单细胞凝胶电泳技术(彗星试验)检测淋巴细胞的染色体畸变和DNA损伤情况,用蛋白印迹(western blot)法检测淋巴细胞HSP70表达水平.结果 外周血淋巴细胞微核率和彗星尾长在高暴露组显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);HSP70的表达水平在高暴露组、低暴露组和对照组分别为1.12±0.36,1.34±0.83,0.89±0.40,低暴露组明显高于对照组(P＜0.05);高暴露组工人的外周血淋巴细胞HSP70的表达水平与彗星尾长呈负相关(r=-0.416,P=0.03).结论 焦炉作业环境可诱发外周血淋巴细胞HSP70蛋白表达,较高水平HSP70的表达对细胞DNA损伤具有保护作用.
关键词： 焦炉工人 碱性单细胞凝胶电泳 热应激蛋白70(HSP70) -
γ射线外照射诱发DNA损伤的研究
[目的] 研究γ射线对小鼠外周血淋巴细胞DNA的损伤效应.[方法] 分别应用中性、碱性单细胞凝胶电泳技术检测不同剂量γ射线外照射诱导小鼠外周血淋巴细胞DNA的单链和双链断裂.[结果] 0、1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、30.0、40.0、60.0 Gy γ射线照射小鼠外周血淋巴细胞后,因DNA双链断裂而发生迁移的细胞比率分别为3.9%、9.0%、28.0%、32.0%、44.0%、56.0%、64.0%、96.0%、96.0%,细胞DNA迁移长度分别为(23.42±1.32)μm、(30.50±2.14)μm、(37.43±0.75)μm、(47.87±1.50)μm、(54.33±0.33)μm、(60.72±1.93)μm、(71.66±0.68)μm、(74.00±1.86)μm、(66.41±3.68)μm.0、0.5、1.0、3.0、5.0、10.0 Gy γ射线照射小鼠外周血淋巴细胞后,因DNA单链断裂而发生迁移的细胞比率分别为1.80%、7.20%、8.10%、10.90%、23.68%、27.77%,细胞DNA迁移长度分别为(21.59±0.49)μm、(25.58±1.13)μm、(27.09±0.5)μm、(27.18±0.66)μm、(36.25±1.15)μm、(53.28±0.13)μm.γ射线外照射对小鼠外周血淋巴细胞DNA具有明显的损伤作用,彗星细胞百分率显著增加,DNA电泳迁移,且迁移的距离与照射剂量之间呈良好的线性关系.[结论] 单细胞凝胶电泳不但能用于检测辐射所致离体细胞DNA单链的损伤效应,还能用来研究离体细胞DNA双链的辐射损伤和修复作用,并有望成为新一代生物剂量计.
-
胭脂红对3T3细胞DNA损伤的SCGE检测
目的 研究人工合成偶氮类色素胭脂红对体外培养小鼠胚胎成纤维细胞株(NIH3T3)DNA的损伤作用.方法 单层培养的3T3细胞中加入不同浓度胭脂红培养4 h,用碱性单细胞凝胶电泳技术(single cell gel electrophoresis, SCGE)检测3T3细胞DNA的单链断裂(single-strand breaks,SSBs)情况.结果 各染毒组彗星细胞率、彗星细胞的尾长、尾部DNA含量及尾矩与胭脂红浓度正相关,呈剂量-反应关系.结论 胭脂红对体外培养3T3细胞DNA具有损伤作用,浓度越大,损伤越严重.
-
碱性单细胞凝胶电泳铺胶技术的改进
目的聚苯乙烯孔槽单层铺胶技术在碱性单细胞凝胶电泳中的可行性研究.方法自制聚苯乙烯孔槽的载胶片,将1%低熔点凝胶与淋巴细胞混合后单层铺胶,经6 C-y γ射线照射后进行碱性单细胞凝胶电泳,观察胶面和淋巴细胞的DNA损伤情况.结果载胶片孔槽单层灌胶后胶面平整,操作过程无脱落;淋巴细胞DNA电泳图像清晰,6 Gy照射产生的"彗星"形态特征明显.结论采用聚苯乙烯孔槽进行单层铺胶的技术,可以克服碱性单细胞凝胶电泳中的胶板脱落等问题.
-
利用单细胞凝胶技术估算淋巴细胞受照剂量
目的明确γ射线照射致淋巴细胞DNA损伤的量效关系,拟合曲线方程.方法采用聚苯乙烯凹槽单层铺胶后进行碱性单细胞凝胶电泳,观察γ射线外照射引起的人外周血淋巴细胞DNA损伤效应.应用IPP软件采集"彗星"尾长,利用SPSS软件进行数据分析和曲线拟合.结果γ射线照射导致淋巴细胞DNA单链断裂,DNA断片电泳图像清晰."彗星"尾长与照射剂量正相关(r=0.907,P＜0.01),量效曲线的拟合方程为y=109.369319-40.258796x+13.636240x2(P＜0.001).结论一元二次方程可以很好反映淋巴细胞DNA断片迁移长度与γ射线照射剂量之间的量效曲线.
-
精子碱性单细胞凝胶电泳法优化条件的建立及效果分析
目的:探讨精子碱性单细胞凝胶电泳法(SCGE)的主要影响因素,并优化条件,以利于标准化. 方法:采用不同浓度H2O2处理精子,碱性SCGE检测精子DNA碎片(SDF),探讨凝胶层数、DNA解旋及电泳时的pH、DNA解旋及电泳时间、计数精子数对结果的影响,分析优化后方法的重复性,并用于检测40例精液标本. 结果:3层琼脂糖凝胶可降低本底,DNA解旋及电泳缓冲液佳pH值为10,佳DNA解旋及电泳时间分别为40 min和30 min,计数50个精子即可保证结果的可靠性.优化后的碱性SCGE,用尾部DNA含量百分比表示,其批内、批间变异系数(CV)分别为3.12％、7.13％,用DNA损伤得分表示,其批内、批间CV分别为2.38％和6.09％.与健康生育男性相比,少弱畸形精子症不育男性精液SDF显著升高(P＜0.05). 结论:优化后的精子碱性SCGE,重复性好,易于标准化,可用于不育男性SDF检测,适合在临床推广应用.
-
急性白血病化疗后"凋亡彗星"的检测及临床意义
目的:观察急性白血病化疗后"凋亡彗星"的变化及其与临床疗效的关系.方法:采用改良Singh法(改良碱性单细胞凝胶电泳,即"彗星试验")检测15例急性白血病患者化疗后4、8、12、24、36和72 h"凋亡彗星"的变化.结果:化疗前"凋亡彗星"均＜0.5%,化疗8 h开始增高,24 h达高峰 ,"凋亡彗星"百分率＞98.0%、骨髓白血病细胞减少指数(MBDI)＞65.0%的11例经 1个疗程化疗完全缓解;"凋亡彗星"百分率为95.5%、MBDI为18.5%的1例经2个疗程化疗完全缓解;"凋亡彗星"百分率为84.0%、MBDI为6.1%的1例经2个疗程化疗部分缓解;"凋亡彗星"百分率为3.0%和5.5%、MBDI为1.1%和1.6%的2例患者临床未缓解. 结论:应用"彗星试验"在急性白血病患者化疗过程中可检出大量早期凋亡细胞;"凋亡彗星"的检测是早期判断化疗疗效的良好指标.
