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线粒体DNA 4977 bp缺失和彗星分析评价肿瘤细胞的辐射敏感性
目的 探讨mtDNA4977bp缺失和彗星分析用于肿瘤细胞辐射敏感性检测的可行性.方法 选取3种不同肿瘤细胞株:肝癌细胞(HepG2)、食管癌细胞(EC-9706)和乳腺癌细胞(MCF-7).采用MTT法检测肿瘤细胞经γ射线照射后的存活分数(SF);巢式PCR法测肿瘤细胞的mtDNA 4977bp缺失率;单细胞凝胶电泳(SCGE)检测肿瘤细胞的DNA断裂水平.结果 用MTT法发现HepG2和EC-9706细胞的辐射敏感性高于MCF-7细胞.8 Gy照射后HepG2和EC-9706 mtDNA 4977 bp缺失率明显高于MCF-7细胞(P＜0.05),证实HepG2和EC-9706细胞的辐射敏感性高于MCF-7细胞.多种方法分析结果说明3种肿瘤细胞在8 Gy照后表现出的辐射敏感性差异有统计学意义.结论 多种生物学指标的综合应用,可能更加客观准确地评价肿瘤细胞的辐射敏感性.
关键词： 线粒体DNA4977bp缺失 彗星分析 巢式PeR DNA损伤 辐射敏感性 -
碳离子辐射引起Hela细胞线粒体DNA 4 977 bp的缺失
背景:线粒体DNA 4 977 bp缺失的累积对衰老的多细胞动物来说是一个显著的特征,同时也与各种肿瘤细胞的转移和凋亡有关.目前的研究己证明辐射可特异性地诱导此缺失的产生,有望将其作为新的DNA水平的辐射损伤生物剂量标记.目的:用聚合酶链反应方法检测碳离子辐射引起的Hela细胞线粒体DNA 4 977 bp突变缺失.并观察碳离子辐射剂量及辐射时间与线粒体DNA 4 977 bp缺失的相关性.设计、时间及地点:细胞DNA水甲的对照实验,于2008-10/11在甘肃省兰州市近代物理研究所完成.材料:人宫颈癌细胞Hela细胞株.方法:Hela细胞经2-8 Gy的碳离子辐射后,于2～24 h各个时间点分别提取包含线粒体DNA的全基因组DNA,并用聚合酶链反应法扩增线粒体DNA 4 977 bp缺失的特异片段,通过限制反应模板浓度和聚合酶链反应循环数的方法进行定性分析.主要观察指标:碳离子辐射剂量及辐射时间对线粒体DNA 4 97H7 bp缺失的影响.结果:经2 Gy辐照处理的Hela细胞在2,4,8,24 h 4个时间点的检测中均无聚合酶链反应阳性产物,8 Gy辐照处理的Hela细胞在12,16,24 h 3个时间点可检测到线粒体DNA 4 977 bp缺失,且随时间延长而累积.辐照后12 h Hela细胞在8 Gy辐照处理后可检测到线粒体DNA 4 977 bp缺失,辐照后16和24 h Hela细胞在6,8 Gy辐照处理后可检测到线粒体DNA4 977 bp缺失.结论:碳离子辐射引起的Hela细胞线粒体DNA 4 977 bp缺失存在剂量相关性,且其累计程度可能与辐射时间有关.
关键词： 聚合酶链式反应 碳离子 Hela细胞 线粒体DNA4977bp缺失
