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含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸1826对Lewis肺癌放疗联合作用及其剂量-效应关系
目的 探讨含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸( unmethylated cytosine-phosphate-guanine oligodeoxynucleotide,CpG ODN) 1826对X射线照射荷瘤小鼠Lewis肺癌的联合作用及其剂量-效应关系.方法 在C57BL/6J纯系小鼠右前腋窝接种Lewis肺癌细胞,制备荷瘤小鼠模型.将64只荷瘤小鼠按完全随机化方法随机分为对照组、X射线照射(IR)组、低剂量CpG ODN1826组(0.15 mg)、中剂量CpG ODN1826组(0.30 rag)、高剂量CpG ODN1826组(0.45 mg)、低剂量CpG ODN826+ IR组(CPG1826 0.15 mg+ IR)、中剂量CpG ODN1826+ IR组(CpG 0.30 mg+ IR)和高剂量CpG ODN1826+ IR组(CpG 0.45 mg+ IR),每组8只.实验的第1、2、9天注射CpG ODN1826.实验的第2天开始X射线照射,1次/d,2.50 Gy/次,总剂量12.50 Gy.观察各组移植瘤生长速度和各治疗组肿瘤生长延迟时间(TGD),用DNA断裂的原位末端标记法检测细胞凋亡.结果 成功建立荷瘤小鼠Lewis肺癌模型,成瘤率为100％.经治疗后,各组小鼠肿瘤体积都较对照组明显减小,CpG ODN1826 0.45 mg+ IR组移植瘤体积小.DNA断裂的原位末端标记法(TUNEL)法检测细胞凋亡率分别为(2.40±0.55)％、(5.50±0.76)％、(7.13±0.83)％、(11.63±1.06)％、(19.13±0.83)％、(12.88±0.83)％、(20.57±2.37)％和(28.17±3.31)％.各治疗组都明显高于对照组(t=11.15、7.91、17.82、39.48、24.73、16.61和17.05,P＜0.05),不同剂量CpG ODN1826 +IR组显著高于IR组(t=13.78、15.08和17.47,P ＜0.05)和不同剂量CpG ODN1826组(t=18.53、9.66和7.51,P ＜0.05).结论 CpG ODN1826能明显地抑制肿瘤细胞生长,促进肿瘤细胞凋亡,且呈剂量-效应关系.
关键词： Lewis肺癌 含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸 X射线照射 肿瘤生长延迟 凋亡 -
含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸7909对X射线诱导人肺腺癌A549细胞周期阻滞和凋亡的影响与ATM激酶的关系
目的 探讨含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸( unmcthylated cytosine-phosphateguanine oligodeoxynucleotides,CpG ODN) 7909对X射线诱导人肺腺癌A549细胞周期阻滞和凋亡的影响及毛细血管扩张共济失调突变( ATM)激酶磷酸化在这一过程中的作用.方法 人肺腺癌A549细胞用随机表法分为5组,对照组、CpG组、单纯照射组、CpG+X射线组和ATM siRNA+CpG+X射线组.采用集落形成法观察细胞存活率.流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡.Western blot检测ATM激酶及其下游底物周期检测点激酶2(checkpoint kinase 2,Chk2)和P53蛋白的表达.结果 A549细胞经CpG ODN7909预处理后,在X射线照射下生长缓慢,集落形成明显减少,与单纯照射组比较,差异有统计学意义(t=13.41,P＜0.05)；增强了X射线诱导的人肺腺癌A549细胞G2/M期阻滞和凋亡,与单纯照射组比较,差异有统计学意义(t=17.32和7.71,P＜0.05)；明显增加了X射线诱导的ATM、Chk2及P53蛋白磷酸化水平；小分子干扰RNA暂时性抑制ATM的表达后,CpG ODN7909对X射线诱导G2/M期阻滞及凋亡的作用减弱,与CpG+X射线组比较,差异有统计学意义(t=26.84和2.98,P＜0.05).结论 CpG ODN7909在体外增强了X射线诱导的人肺腺癌A549细胞ATM激酶磷酸化,这一作用可能参与G2/M期阻滞和凋亡的调节.
