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复制检测点文献资料
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Artemis蛋白磷酸化对紫外线C引发的复制检测点的调控
目的 研究复制叉前进受阻后Artemis蛋白S516和S645丝氨酸位点的磷酸化和对细胞周期复制检测点的影响.方法 Western-blotting检测细胞受紫外线C照射后Artemis S516和S645两个位点的磷酸化变化;突变Artemis蛋白的第516和645位氨基酸,构建非磷酸化和模拟磷酸化的突变体S516-645A和S516-645D表达质粒,转染HEK 293细胞建立稳定表达细胞系;流式细胞仪检测受UVC照射后的细胞周期,Western-blotting检测UVC照射后2、6、12 h的Chk1、γ-H2AX、Cdk2蛋白的表达变化,免疫共沉淀激酶实验检测Cdk2 IP激酶的活性.结果 Artemis蛋白S516和S645位点在UVC照射后发生迅速和持久的磷酸化,ATR是Artemis S516和S645磷酸化的主要激酶;S516-645A非磷酸化双突变导致细胞周期在S期复制检测点停留时间延长.Artemis S516-645A双突变不影响Chk1、Cdk2、γ-H2AX蛋白表达水平,却抑制了Cdk2 IP激酶的活性.结论 ATR激酶对Artemis蛋白S516和S645位点的磷酸化促进了细胞周期从UVC引发的复制检测点中恢复.
