首页 > 文献资料
-
正交设计优化CYP2C19基因多态性PCR体系
目的 建立通用的CYP2C19*2和CYP2C19*3基因PCR反应体系,筛选出各反应因素的佳水平,并确定佳退火温度.方法 采用正交设计L16(45)在4个水平5个因素(Taq酶、引物、Mg2+、dNTP和模板DNA)对CYP2C19*2和CYP2C19*3基因PCR反应体系进行实验,两次结果分别用统计软件MINITAB进行分析,利用梯度PCR确定引物佳退火温度.结果 CYP2C19*2和CYP2C19*3基因PCR反应的佳反应条件为25μl体系中包含:Mg2+(25 mmol/L)1.0μ1、dNTPs(2.5 mmol/L)2.0μl、上游引物和下游引物(2.5 μmol/L)各1.5μl、模板DNA约30 ng、10×PCR缓冲液2.5μl、Taq酶2U、染料2.0μ1,退火温度为55℃.结论 建立了CYP2C19基因多态性检测方法的通用PCR反应条件.
-
正交优化乙醛脱氢酶2基因多态性PCR体系
目的 建立通用的ALDH2基因PCR反应体系,筛选出各反应因素的佳水平.方法 采用正交设计L16(45)在4个水平5个因素(Taq酶、引物、Mg2+、dNTP和模板DNA)对ALDH2基因PCR反应体系进行实验,两次结果分别用统计软件MINITAB进行分析,利用梯度PCR确定引物佳退火温度.结果 ALDH2基因PCR反应的佳反应条件为:为25μL体系中包含:Mg2+(25 mM)2.5μL、dNTPs(2.5 mM)2.0μL、引物上游和引物下游各(2.5μM)3.0μL、模板DNA 3.0μL、10×PCR buffer 2.5μL、Taq酶1.5U,退火温度为60℃.结论 这一通用PCR反应条件的建立为实现ALDH2基因多态性检测建立了基础.