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双载体文献资料
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Cys突变体凝血Ⅷ因子的蛋白质反式剪接
为改善蛋白质反式剪接效率,将B-区缺失型FⅧ (BDD-FⅧ)重链的Tyr664和轻链的Thr1826突变为Cys,双载体共转COS-7细胞,观察了细胞内蛋白质剪接、二硫键形成和细胞培养上清液中分泌的剪接BDD-FⅧ量和活性.Western blotting检测结果显示,Cys突变可在细胞内形成链间二硫键,剪接BDD-FⅧ蛋白量明显增加;双夹心ELISA检测分泌的剪接BDD-FⅧ为(128±24) ng.mL-1,明显高于对照(89±15) ng.mL-1；Coatest 法检测结果显示,细胞分泌的凝血活性为(0.94±0.08) u.mL-1,也明显高于对照(0.62±0.15) u.mL-1.结果表明,链间二硫键形成可显著提高基于蛋白质剪接的双载体转BDD-FⅧ基因作用,为进一步动物体内实验提供了依据.
