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人有机阳离子转运体2文献资料
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稳定表达hMATE1及共表达hMATE1与hOCT1或hOCT2细胞模型的构建
为构建稳定表达人多药及毒素外排转运体1 (hMATE1)的转基因细胞模型,提取人肾总mRNA,经逆转录PCR获得hMATE1 cDNA,借助HindⅢ、Kpn Ⅰ两个酶切位点与pcDNA3.1(+)重组获得重组质粒.将pcDNA3.1(+)-hMA TE1重组质粒转染至MDCK、MDCK-hOCT1和MDCK-hOCT2细胞中,经潮霉素B抗性筛选后,以4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)和N-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)的积聚实验筛选获得具有良好hMATE1功能的单克隆.测定筛选获得的细胞中转运体mRNA的表达量,并表征其对二甲双胍的积聚或对西咪替丁的转运能力.结果表明,本研究构建的MDCK-hMATE1、MDCK-hOCT 1/hMATE1、MDCK-hOCT2/hMATE1细胞模型均高表达hMATE1 mRNA,MDCK-hMATE1细胞对二甲双胍的积聚为转染空载体细胞的17.6倍;MDCK-hOCT1/hMATE1和MDCK-hOCT2/hMATE1细胞对西咪替丁的净外排率分别为17.5和3.65.因此,本研究成功构建了稳定表达hMATE1及共表达hMATE1与hOCT1或hOCT2的细胞模型,可用于hMATE1及其与hOCT1或hOCT2共同参与的药物转运或药物-药物相互作用的体外研究.
