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基于虚拟筛选、分子对接和生物测活的TRPV3选择性小分子拮抗剂的发现
瞬时受体电位香草酸型通道第三亚型(transient receptor potential vanilloid 3, TRPV3)与伤害性感受、热感受等重要生理功能密切相关,发现靶向TRPV3通道的选择性小分子拮抗剂对深入研究TRPV3通道的病生理功能和促进TRPV通道的基础研究和新药靶点研究具有重要的意义.本文基于已知的TRPV3小分子拮抗剂,提出基于配体的计算机辅助药物设计的方法进行选择性小分子拮抗剂的骨架跃迁,采用三维形状和静电相似性的虚拟筛选策略,对PKU-CNCL、Specs化合物库进行大规模的虚拟筛选;同时以TRPV1晶体结构为模板,并结合TRPV3的已解析出来的N末端ARD区域的晶体结构,构建了人TRPV3的晶体结构的单体模型,以TRPV3单体模型进行了TRPV3小分子拮抗剂的分子对接分析,将其应用于虚拟筛选和骨架跃迁中.经过两轮的虚拟筛选和生物活性评价,发现了对TRPV3具有选择性抑制作用且抑制活性IC50为18.0 ± 1.1 μmol·L-1 (n = 4)的新型骨架结构化合物V-39,该化合物与TRPV3相互作用的重要氨基酸残基为第310和314位组氨酸以及第577位精氨酸.本文研究结果可以用于进一步的结构改造和优化,有助于指导新型的TRPV3选择性拮抗剂的药物设计.
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TRPV3通道在干酵母致发热大鼠下丘脑的表达及机制
目的 探讨TRPV3通道在干酵母致发热大鼠下丘脑组织中的表达变化及其对体温的影响.方法 采用20%干酵母混悬液背部皮下注射复制发热大鼠模型(模型组),对照组大鼠皮下注射相应体积的生理盐水.观察大鼠的体温、下丘脑组织Ca2+浓度和环磷酸腺苷的变化;通过RT-PCR和Western blot法检测TRPV3通道在下丘脑中的表达变化趋势,分析其与体温之间的相关性.结果 模型组大鼠的体温在注射干酵母混悬液后明显上升(P<0.01).模型组大鼠下丘脑组织环磷酸腺苷与对照组比较显著增加(P<0.01),Ca2+浓度差异无统计学意义(P>0.05).模型组大鼠下丘脑组织TRPV3表达趋势与对照组比较显著增多(P<0.05);TRPV3蛋白表达量变化与体温变化值呈正相关(P<0.05).结论 干酵母导致大鼠发热过程中,下丘脑组织TRPV3通道被激活,参与体温调节.
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TRPV3在膀胱癌细胞中的表达及其对膀胱癌细胞增殖迁移能力的影响
目的 探讨瞬时感受器电位香草酸受体3离子通道蛋白(TRPV3)在膀胱癌细胞中的mRNA表达水平,以及TR-PV3激动剂Thymol对膀胱癌细胞增殖和迁移能力的影响.方法 采用实时荧光定量PCR检测TRPV3 mRNA在膀胱癌细胞系RT4,UM-UC-3.SW780,J82,TCC-SUP,T24和人膀胱上皮永生化细胞系SV-HUC-1中的表达;利用Thymol激活膀胱癌细胞TRPV3通道,并用WST-1和细胞划痕实验分别检测Thymol激活TRPV3后膀胱癌细胞的增殖和迁移能力变化.结果 相较于正常人膀胱上皮细胞SV-HUC-1,各种膀胱癌细胞系的TRPV3 mRNA表达水平均明显下调(P＜0.0001).与不加激动剂的DMSO对照组比较,加入Thymol激活膀胱癌细胞TRPV3通道后,膀胱癌细胞的增殖和迁移能力明显降低(P＜0.01).结论 TRPV3基因在膀胱癌细胞中表达明显降低,激活TRPV3通道后可明显减慢膀胱癌细胞增殖和迁移速度.
