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茉莉酸甲酯诱导表达文献资料
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北柴胡糖基转移酶基因BcUGT1的表达分析及其原核表达与蛋白纯化
本研究分析了北柴胡糖基转移酶基因BcUGT1ORF序列,预测了其蛋白三维结构,利用qRT-PCR分析了BcUGT1的茉莉酸甲酯诱导表达和组织表达特性.结果表明,BcUGT1可能参与柴胡皂苷生物合成.随后,构建了BcUGT1原核表达载体,成功诱导出目标蛋白,并进行了纯化.原核表达实验中共采用了3种载体:pRSET-A、pET-28a(+)和pET-30a(+),3种宿主菌:BL21 (DE3) plysS、BL21A1和BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL,进行了不同诱导条件的探索,包括不同诱导物(L-阿拉伯糖和IPTG)的不同浓度、不同诱导时间和温度,结果以pET-28a(+)和pET-30a(+)为载体,BL2 1-CodonPlus (DE3)-RIPL为宿主菌,0.5或1 mmol·L-1 IPTG,16℃,20 h为条件,诱导出目标蛋白.利用PrepEase(R) His标签蛋白纯化试剂盒,纯化获得了目标蛋白,为后续开展BcUGT1基因的功能研究奠定了基础.
