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蛋白质C端测序文献资料
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HPLC-ESI-ITMS在药品质量控制中确证胰岛素和胰岛素B链C端氨基酸序列的应用研究
在药品质量控制中应用HPLC-ESI-IT (Ion Trap) MS分别确证胰岛素和胰岛素B链的C端氨基酸序列.取胰岛素标准品溶液或者胰岛素B链溶液适量,加入羧肽酶P及羧肽酶Y溶液适量降解胰岛素或者胰岛素B链C端,在预定的时间点取出酶降解反应液适量,加入等体积1%甲酸停止反应,混旋均匀后制成供试液,供HPLC-ESI-IT MS分析测定.采用Zorbax Prosphere C18柱(2.1 mm×150 mm,300A,5 μm)分离,以流动相进行梯度洗脱[A相:水-乙腈-三氟乙酸(98:2:0.02),B相:乙腈-水-三氟乙酸(98:2:0.02)].柱后修饰"TFAfix"溶液为丙酸-异丙醇(2:8)的混合溶液.ESI-ITMS测定供试液中梯度多肽系列(彼此相差1个C端氨基酸残基)的分子质量,计算出分子质量相近的相邻两肽段的系列分子质量差值,即可得到待测样品C端系列氨基酸残基质量的实验值.胰岛素的B链C端的第1个氨基酸残基丙氨酸残基可以被准确地确证;同样还原修饰的胰岛素B链C端的第1个氨基酸残基丙氨酸残基也能被准确地确证.本研究在nmol样品水平准确地确证胰岛素和胰岛素B链各一个C端氨基酸,符合重组DNA制品中试产品的质量控制要求.本实验方法不必将胰岛素经还原修饰将A链从B链裂解,直接确证胰岛素的C端氨基酸残基,避免还原修饰和纯化的烦琐操作,方法简便.
关键词： HPLC-ESI-ITMS 蛋白质C端测序 羧肽酶P和羧肽酶Y 胰岛素
