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体内彗星试验方法学研究进展
体内彗星试验是一种简单的DNA损伤检测方法,可检测单链断裂、双链断裂、碱不稳定位点、DNA-DNA和DNA-蛋白质交联等.2011年1 1月,修订完成的ICH S2 (R1)指导原则将体内彗星试验列入遗传毒性标准组合体内首选的第2个检测终点,故规范试验操作方法具有重要意义.该文主要依据JaCVAM联合验证试验,从给药方案设计、取样、样品处理、电泳,DNA损伤检测指标及可接受标准6个方面阐述目前公认的体内彗星试验方法,为该试验用于药物新药安全性评价研究等领域提供方法学参考.此外,本文就体内彗星试验的主要影响因素进行了探讨,希望进一步提高该试验准确性和可重复性.
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大鼠体内彗星试验方法的建立与应用研究
目的 建立大鼠肝细胞和外周血淋巴细胞的体内彗星试验方法,并应用该方法对遗传毒性阳性物甲磺酸乙酯(EMS)和环磷酰胺(CPA)进行检测.方法 选择SD雄性大鼠为实验动物,分别给予不同剂量EMS和CPA.给药结束后,采集外周血样本和摘取动物左侧肝叶组织样本,铺制成单细胞凝胶玻片.玻片经裂解、解旋、电泳、中和、脱水等步骤后,得到可观察的实验标本.染色标本,并在40×荧光显微镜下观察拍照,使用专业分析软件对单细胞电泳图像进行分析和测定.结果 成功建立了基于大鼠肝细胞和外周血淋巴细胞的体内彗星试验方法.经该方法检测,EMS结果为阳性,CPA结果为阴性,EMS适合作为本方法的阳性对照.结论 成功建立大鼠体内彗星试验方法,并可应用于遗传毒性检测.
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体内彗星试验在药物遗传毒性评价中的研究方法
体内彗星试验是采用单细胞凝胶电泳的方法检测体内DNA损伤的技术.具有灵敏度高、操作简便、经济快速等优点.随着遗传毒性研究的发展,体内彗星试验已经成为重要的药物遗传毒性评价方法.对动物试验阶段和彗星试验阶段各操作步骤进行了归纳总结,以期对相关方法学建立提供参考,并提出采用简化和标准化的研究方法将有利于体内彗星试验在药物遗传毒性评价的应用.
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体内碱性彗星试验与微核试验联合测定甲磺酸乙酯遗传毒性方法的建立
目的:建立彗星试验与微核试验结合的检测方法,应用其评价甲磺酸乙酯(EMS)对大鼠的遗传毒性.方法:试验设置阴性对照组(0.9％的生理盐水)及EMS低(50 mg/kg)、中(100 mg/kg)、高(200 mg/kg)剂量组,共4组,每组5只雄性SD大鼠,分别在0、24、48和69 h经口灌胃1次性给予受试物,在末次给药后3h进行外周血采样,外周血经固定、洗脱、荧光染色后进行微核试验采用流式细胞术测定网织红细胞微核率;然后处死动物进行肝脏、肾脏和胃组织的取样,样品经单细胞悬液制备、制片、裂解、解旋电泳及染色后,应用Comet Assay IV软件进行彗星试验数据的收集.结果:彗星试验中,50、100和200 mg/kg EMS染毒组肝脏、肾脏和胃的尾DNA百分含量与阴性对照组相比均显著增加,且呈剂量反应关系(r=0.93,P＜0.05);微核试验中,EMS高剂量组骨髓毒性太大未收集到足够的细胞用于检测,仅EMS中剂量组外周血网织红细胞微核率较对照组显著增加(P＜0.01).结论:初步建立了大鼠多靶器官彗星试验方法;在同一试验中彗星试验和微核试验联合可节省动物数量,提高试验效率.
