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美妥珠单抗(HcHAb18)质量标准的建立及理化对照品结构确证
目的:建立美妥珠单抗的质控方法和质量标准.方法:利用乳酸脱氢酶释放试验检查外周血分离的单核细胞对人肺腺癌A549细胞的杀伤效应测定美妥珠单抗的生物学活性;非还原CE-SDS和SEC-HPLC测定纯度;胰酶酶切后HPLC测定其肽图;实时定量PCR检测CHO宿主DNA残留量;采用ELISA法分别测定抗原CD147结合力、残留ProA含量和残留宿主蛋白含量;CE-SDS法测定等电点;液质联用技术进行相对分子质量、肽图及糖型分析;其余检测项目按《中华人民共和国药典》2010年版三部规定进行.结果:用建立的方法对美妥珠单抗的成品进行了检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》、《人用单克隆抗体质量控制技术指导原则》和《中华人民共和国药典》2010年版三部的要求;对理化对照品进行了一级结构确证,相对分子质量、氨基酸序列和糖型分析结果均与理论预测相符.结论:建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,可用于该类产品的常规检定.
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人血清白蛋白的仿生亲和配基研究
目的研究人白蛋白特异的仿生亲和配体和仿生亲和分离技术.方法合成固定化亲和配体库,以人血浆为原料筛选,进行人白蛋白分离实验.结果筛选出两个可以特异结合人血清白蛋白的亲和配体.其中3-氨甲基吡啶配位体对白蛋白的一步纯化倍数为18倍,回收率87.5%.结论固定化3-氨甲基吡啶可以特异结合人血清白蛋白.
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化学对照品色谱纯度检测的影响因素
目的 探索在药品对照品标化中色谱条件的影响因素.方法 以2个待标化的对照品为例,采用HPLC-DAD法对其纯度进行预标化.结果 在HPLC中色谱柱类型、流动相的比例、柱温、流速、检测波长对其纯度检查均有一定的影响.结论 色谱条件的影响因素较多,在实际应用中可综合考虑.
关键词： 纯度分析 对照品 高效液相色谱-二级管阵列检测 -
阿司匹林制备方法的比较研究
目的：探讨不同催化剂下制备阿司匹林中水杨酸的含量，重结晶的优化条件以及重结晶后水杨酸的含量测定。方法使用不同的催化剂制备阿司匹林的粗品，经过产率和水杨酸含量的综合分析，选出一种较好的催化剂，终确定一种优于实验教材的工艺。结果无论选哪种催化剂，使用乙醇∶乙醚∶水=4∶1∶15的混合溶剂制得的重结晶产品都比使用乙醇∶水=1∶3制得的重结晶产品的产率高，杂质的含量少。结论阿司匹林的制备、重结晶的佳工艺是：使用亚硫酸氢钠做催化剂，使用乙醇∶乙醚∶水=4∶1∶15的混合溶剂制得重结晶产品。
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聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯纯度分析及其大鼠静脉注射药动学行为
目的 比较纯化和市售聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯(d-α-tocopherol polyethylene glycol1000 succinate,TPGS)的纯度,并对不同来源的TPGS大鼠静脉注射的药动学行为进行考察.方法 采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法,对不同来源TPGS(分别为纯化、德国BASF公司和美国Sigma公司)中主要杂质聚乙二醇1000(PEG1000)和聚乙二醇1000维生素E琥珀酸双酯(di-d-α-tocopherol polyethylene glycol 1000 succinate,di-TPGS)的含量进行测定,计算TPGS纯度.以DiR为模型药物,采用荧光分析法考察不同来源TPGS的药动学行为.结果 与市售TPGS相比,纯化TPGS(TPGS-Purified)、BASF来源的TPGS (TPGS-BASF)和Sigma来源的TPGS (TPGS-Sigma)纯度分别为100.0％、86.70％和90.98％.以聚山梨酯80(Tween 80)作为参照,TPGS-Purified/DiR、TPGS-BASF/DiR和TPGS-Sigma/DiR的AUC(0-24h)和MRT(0-24h)分别为Tween 80/DiR的2.75、2.53、2.72倍和1.77、1.68、1.84倍.各TPGS/DiR组中AUC(0-24h)和MRT(0-24h)均无显著性差异.结论 TPGS-Purified纯度接近于100％,以其制备的胶束循环时间较长,为高纯度TPGS在静脉注射中的应用提供了一定指导.
关键词： 聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯 纯度分析 DiR 药动学 静脉注射 -
多肽药物分析方法研究进展
介绍多肽药物的生物活性分析、结构分析、纯度分析的发展状况.
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脐血CD34+细胞的分离与纯化
脐血造血干细胞的分离是进行干细胞移植、体外扩增培养的关键.研究采用明胶自然沉降法、Ficoll分层法分离脐血MNC后,用MACS分离纯化CD34+细胞,计数并用流式细胞仪进行纯度分析.结果 显示:每份脐血的采集量平均为95+52ml,3g/dl明胶自然沉降法所获MNC密度平均为(5.76±0.67)×107/ml;CD34+细胞密度平均为(5.53±1.16)×105/ml,较Ficoll分层法高(P＜0.01).因此,3g/dl明胶自然沉降法是一种较理想的分离MNC的方法,用明胶沉降法和MACS相结合是分离脐血 CD34+细胞的理想方法.
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高效毛细管电泳法分析rhIL-2的纯度
重组人白细胞介素2(rhIL-2)是利用基因工程技术,从大肠杆菌中获得的.rhIL 2能抑制肿瘤细胞的增殖,是肿瘤过继免疫治疗中应用广泛,研究得多的细胞因子[1].作为生物制剂,在药品的质量监控中,其纯度分析又是非常重要的指标之一.目前,常用的纯度鉴定方法有凝胶电泳和高效液相色谱(HPLC).与HPLC相比,高效毛细管电泳(HPCE)具有更高的分辨率和灵敏度,且同时具有快效、高效、自动化、上样量少等特点[2].本文运用HPCE对rhIL-2进行纯度分析,建立了快速简便的测定方法.
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离子色谱快速检测壳寡糖含量
目的:为了快速准确的进行壳寡糖样品的检测,建立一种分离度好、灵敏度高的壳寡糖离子色谱快速检测方法.方法:实验选用Dionex-CarboPac PA104×50 mm离子交换色谱柱,通过优化柱温、淋洗液配比及浓度等色谱条件,将不同聚合度的壳寡糖在30 min内实现分离.分离后的壳寡糖样品通过计算聚合度为壳2～6糖的含量,检验其样品中壳寡糖的纯度.结果:样品浓度在2.00～10.00μg· mL-1范围内线性关系良好(r≥0.999 0),精密度实验RSD在0.1％～1.6％之间,样品加标回收率93.2％～105.0％.3种壳寡糖样品中2～6个聚合度壳寡糖的含量之和分别为25.944 μg· g-1、26.406 μg· g-1、25.374 μg· g-1,计算得到纯度为86.5％、88.0％和84.6％,符合国家标准要求.结论:该方法需要样品量少,检验快速,无需衍生,为壳寡糖质量分析、组分分离提供了依据.
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重组人源化兔抗VEGF单克隆抗体质控方法与质量标准研究
目的:建立重组人源化兔抗VEGF单抗的质控方法和质量标准.方法:利用HUVEC细胞增殖抑制试验测定重组人源化兔抗VEGF单抗的生物学活性:SDS-PAGE和SEC-HPLC测定纯度；胰酶酶切,HPLC测定其肽图；实时定量PCR检测CHO宿主DNA残留量；采用EHSA法分别测定VEGF结合力、残留ProA含量和残留菌体蛋白含量；水平等电聚焦电泳法测定等电点；其余检测项目按中国药典2010年版三部规定进行.结果:用建立的方法对重组人源化兔抗VEGF单抗的原液和成品进行了检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》、《人用单克隆抗体质量控制技术指导原则》和中国药典2010年版三部的要求.结论:建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,可用于该类产品的常规检定.
