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犹他游动放线菌中酰胺水解酶基因拷贝数增加对转化棘白菌素B效率的影响
目的:利用ΦC31整合酶介导的位点特异性重组方法,构建棘白菌素B酰胺水解酶基因拷贝数增加的犹他游动放线菌重组菌株.方法:构建含有棘白菌素B酰胺水解酶基因的基因整合型质粒pYGCQ-03-13,通过属间接合转移的方法将该基因片段转入犹他游动放线菌SIPI-T2001中;利用静息细胞转化法,考察其对转化效率的影响.结果:筛选得到的阳性重组菌株SIPI-GE.T2001,对棘白菌素B的转化效率高达到61.7%.结论:增加棘白菌素B酰胺水解酶基因拷贝数,有效地提高了犹他游动放线菌对棘白菌素B的转化效率.
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Echinocandin B微生物转化工艺优化
犹他游动放线菌产生的酰基水解酶可以将echinocandin B (ECB)水解脱去酰基侧链得到ECB母核,用于化学合成抗真菌药阿尼芬净.本研究考察并优化了犹他游动放线菌产酶的发酵培养基组分和ECB转化反应体系的有机溶剂、底物浓度,建立了ECB的微生物转化工艺.结果表明,在含麦芽糖30g/L和麦芽浸粉20g/L的发酵培养基中,犹他游动放线菌发酵培养72 h后,加入终浓度为2.55g/L的ECB和7.5%甲醇,转化18h,ECB的转化率为97.8%.进一步在5L发酵罐中进行发酵培养和微生物转化,结果表明该微生物转化工艺可用于制备ECB母核.