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聚乙二醇化重组人生长激素质控难点探讨
聚乙二醇化重组人生长激素(PEG-rhGH)是对重组人生长激素(rhGH)进行PEG修饰的以延长体内半衰期为目的的改构药物.由于PEG的引入,使得修饰后的蛋白质在理化性质以及体内外活性上的复杂程度都远远超出rhGH.本文对PEG-rhGH的两个关键质量控制难点——PEG对rhGH的平均修饰率与PEG在rhGH上的修饰位点进行了详细分析,并对质量标准制定中一些需重点关注之处进行了说明.
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聚乙二醇化重组人尿酸氧化酶质控难点研究进展
聚乙二醇化重组人尿酸氧化酶(PEG-UOX)是对重组人尿酸氧化酶(UOX)进行聚乙二醇修饰以降低其免疫原性和延长体内半衰期为目的的改构药物.由于它是聚乙二醇随机多位点修饰的蛋白药物,使得修饰后的蛋白质在理化性质以及体内外活性上的复杂程度都远远超出重组人尿酸氧化酶.对于此类药物,目前国内外无标准化的质量分析方法.笔者通过整理、归纳近年来关于聚乙二醇修饰药物质控分析技术的文献,对聚乙二醇化重组人尿酸氧化酶的3个关键质量控制难点——聚乙二醇对重组人尿酸氧化酶的平均修饰率、修饰均一度以及聚乙二醇在重组人尿酸氧化酶上的修饰位点所涉及的分析手段进行了综述,以期对国内企业开发此药物提供技术指导.
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荧光胺衍生化法测定3种聚乙二醇化重组人生长激素的平均修饰率
目的:通过对游离氨基进行荧光胺衍生化,测定3种不同结构聚乙二醇化重组人生长激素(PEG-rhGH)的平均修饰率.方法:采用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定PEG-rhGH的相对分子质量,求得理论平均修饰率.通过激发波长与发射波长的选取、正交试验、游离PEG干扰试验、反应稳定性考察等方法学考察,建立荧光胺衍生法测定PEG-rhGH平均修饰率.结果:从质谱法可知PEG-rhGH的理论修饰度为10％.方法学考察结果显示,激发波长与发射波长分别为390 nm与480 nm,溶液pH对试验结果的影响大,低浓度的PEG对试验结果无干扰,在反应开始8 min之内荧光强度稳定.荧光胺法测得3种不同结构PEG-rhGH的修饰度分别为8.8％、9.8％及9.5％,与理论值接近.结论:荧光胺法可作为测定PEG-rhGH平均修饰率的方法,3种PEG化重组人生长激素的平均修饰率为10％.
