首页 > 文献资料
-
成骨细胞骨涎蛋白成熟肽修饰位点和进化踪迹分析
目的 探讨成骨细胞中骨涎蛋白(BSP)的表达以及进化踪迹,并对成熟肽基因行序列分析,获得BSP修饰位点.方法 体外培养成骨细胞,提取成骨细胞总RNA,反转录合成eDNA,以特异性引物扩增BSP成熟肽基因并克隆到pBluescript KS载体,筛选阳性克隆进行序列测定.以成骨细胞的骨涎蛋白为种子序列,利用多种生物信息学工具进行细胞的骨涎蛋白的序列查找及其同源蛋白的搜索,并以此为基础对骨涎蛋白的进化踪迹位点及相关的功能位点进行比较研究.结果 共得到具有完整结构域的同源蛋白序列72条,骨涎蛋白家族的BSP-前肽结构域具16个全家族保守残基,以及10个RGD结合域和BSP结构域的33个亚家族特异性残基.骨涎蛋RGD结构域的配基结合位点主要分布于结合口袋的中间区域.PCR扩增到一特异性的900bp片段,克隆后筛选出阳性克隆进行序列分析,测定结果与数据库的序列基本相同.结论 成骨细胞中能表达并翻译为有活性的BSP,BSP成熟肽存在甲基和乙酰化修饰位点.
-
聚乙二醇化重组人生长激素质控难点探讨
聚乙二醇化重组人生长激素(PEG-rhGH)是对重组人生长激素(rhGH)进行PEG修饰的以延长体内半衰期为目的的改构药物.由于PEG的引入,使得修饰后的蛋白质在理化性质以及体内外活性上的复杂程度都远远超出rhGH.本文对PEG-rhGH的两个关键质量控制难点——PEG对rhGH的平均修饰率与PEG在rhGH上的修饰位点进行了详细分析,并对质量标准制定中一些需重点关注之处进行了说明.
-
聚乙二醇化重组人尿酸氧化酶质控难点研究进展
聚乙二醇化重组人尿酸氧化酶(PEG-UOX)是对重组人尿酸氧化酶(UOX)进行聚乙二醇修饰以降低其免疫原性和延长体内半衰期为目的的改构药物.由于它是聚乙二醇随机多位点修饰的蛋白药物,使得修饰后的蛋白质在理化性质以及体内外活性上的复杂程度都远远超出重组人尿酸氧化酶.对于此类药物,目前国内外无标准化的质量分析方法.笔者通过整理、归纳近年来关于聚乙二醇修饰药物质控分析技术的文献,对聚乙二醇化重组人尿酸氧化酶的3个关键质量控制难点——聚乙二醇对重组人尿酸氧化酶的平均修饰率、修饰均一度以及聚乙二醇在重组人尿酸氧化酶上的修饰位点所涉及的分析手段进行了综述,以期对国内企业开发此药物提供技术指导.
-
清蛋白作为药物载体的PEG化修饰研究进展
清蛋白（白蛋白）是一种理想的药物载体，但由于其在体内半衰期短以及易被酶降解等缺点限制了其应用，然而根据其具有多个修饰位点的结构特点，可通过PEG修饰延长循环时间，阻碍酶的作用等。目前，PEG修饰清蛋白仍处于研究阶段，已有较多关于PEG修饰清蛋白的研究，例如PEG修饰所起的作用、对清蛋白及其制剂的影响，以及修饰位点的选择等。本文对清蛋白的PEG化修饰的相关研究进行综述。
-
YPEG-rhIFN-α2a修饰位点结构解析
目的 对Y型PEG化重组人干扰素α2a的PEG修饰位点进行了相关研究.方法 首先采用HPLC SP方法对YPEG-rhIFN-α2a的不同修饰位点组分进行分离;然后用TPCK胰酶酶切rhIFN-α2a和YPEG-rhIFN-α2a,通过HPLC-RPC法分离酶切肽段,进而用质谱法(MALDI-TOF MS)解析rhIFN-α2a肽段,获得rhIFN-α2a完整的TPCK胰酶肽图信息;后对比分析rhIFN-α2a和YPEG-rhIFN-α2a的HPLC-RPC TPCK胰酶肽图,结合N-端氨基酸序列测定法测定PEG肽段的氨基酸序列,确认YPEG-rhIFN-α2a的PEG修饰位点.结果及结论 结果表明,YPEG-rhIFN-α2a的PEG修饰位点主要为Lys134和Lys31.
-
小鼠SP2/0细胞移植瘤的遗传修饰位点
背景与目的:我们的研究发现BALB/c小鼠是SP2/0细胞移植瘤的敏感小鼠,而C57BL/6J小鼠则是抗性小鼠.本研究利用这两种近交系小鼠和它们杂交的F2代进行移植肿瘤重量遗传修饰位点的检测.方法:对208只BALB/cxC57BL/6J的F2代小鼠左后腿皮下注射5.0×106个SP2/0细胞,在注射后第17天处死小鼠,记录移植瘤的数量和重量.采用覆盖小鼠所有染色体的85个微卫星标记,对208只F2代小鼠进行全基因组扫描,并进行复合区间作图.结果:发现8个变异解释率>10%的位点与肿瘤生长有关(P<0.01),它们分别位于1号(DIMit113,55cM和D1Mit407,52 cM)、4号(D4Mit226,41cM)、9号(D9Mit302,55cM)、10号(D10Mit264,42cM)、11号(D11Mit115,35cM)、14号(D14Mit125,45cM)和18号染色体(D18Mit123,31cM)上.结论:个体对SP2/0细胞移植瘤的易感性受多位点变异控制,找到目标位点有助于基因单倍型确认和肿瘤易感性/抗性基因的精细研究.
