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毒蕈碱性文献资料
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介导乙酰胆碱诱发内皮依赖性血管舒张反应受体的特性
目的针对血管内皮细胞上是否存在M受体的疑点,从基因水平和信号转导机理上探讨介导乙酰胆碱(ACh)诱发内皮依赖性血管舒张反应受体的特性.方法以新鲜分离和传代培养的牛主动脉内皮细胞为实验材料,比较两种内皮细胞M1～M5受体mRNA的分布状况、ACh诱发细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)、环腺苷酸(cAMP)含量变化.①设计高选择性、特异性寡核苷酸探针,采用点杂交方法对内皮细胞M1～M5受体mRNA进行分析,并通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、DNA序列测定及同源性分析确证点杂交的实验结果; ②以Fluo-3和Fura-2为荧光探针,用共聚焦和荧光光度仪测定内皮细胞[Ca2+]i变化;③内皮细胞cAMP含量采用125I放射免疫分析方法测定.结果在新鲜分离的牛主动脉内皮细胞存在M1～M4受体mRNA,内皮细胞经传代培养后仅检测到M4受体mRNA;1和10 μmolL-1 ACh能够引起原代培养内皮细胞[Ca2+]i增加,大增加量为12和19 nmol*L-1;ACh激活原代培养内皮细胞的钙离子信号,表现为单次或连续2次的钙振荡,具有异时性和快速耐受的特点;此外,随ACh浓度增加,原代培养内皮细胞cAMP含量均呈微弱增加趋势;ACh不引起传代培养内皮细胞[Ca2+]i浓度的改变,但能浓度依赖地降低cAMP含量.结论新鲜分离的牛主动脉血管内皮细胞可能表达M1～M4受体,传代培养后仅保留M4受体.介导ACh诱发内皮依赖性血管舒张反应的受体可能为M1或(和)M3受体,其中钙离子是这种受体激活的重要信使物质.
