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Fas通路在扇贝多肽抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡中的作用
目的 从凋亡相关分子Fas(CD95)、Fas相关死亡结构域(Fas associated protein with death domain,FADD)及半胱天冬酶-8(caspase-8)的角度,研究扇贝多肽(polypeptide from Chlamys farreri,PCF)抑制紫外线B(Ultraviolet B,UVB)诱导的人角质形成细胞株(immortalized human keratino,HaCaT)细胞凋亡的作用机制.方法 实验设计为6组:对照组、UVB模型组、UVB+5.68 mmol·L-1维生素C阳性对照组、UVB+5.69 mmol·L-1PCF组、UVB+2.84 mmol·L-1PCF组、UVB+1.42 mmol·L-1PCF组.以正交实验设计确立UVB诱导的HaCaT细胞凋亡模型;琼脂糖凝胶电泳和荧光染色(Hoechst 33258)分析PCF对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡的影响;琼脂糖凝胶电泳分析caspase-8抑制剂(z-IETD-fmk)对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡的影响;逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测Fas(CD95)mRNA的表达;蛋白质印迹法检测FADD及caspase-8蛋白的表达.结果 PCF能明显抑制UVB引起的HacaT细胞凋亡;z-IETD-fmk对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡有明显抑制作用;1.42～5.69 mmol·L-1内的PCF可剂量依赖性抑制UVB引起的Fas,FADD的表达增加及caspase-8的活化.结论 PCF可剂量依赖性抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制Fas,FADD的表达及caspase-8的活化有关.
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替米沙坦对猪心动过速性心肌病心肌细胞Fas/FasL、FADD、Bcl-2/Bax、caspase-3蛋白的影响
目的 研究替米沙坦对猪心动过速性心肌病(tachycardiomyopathy,TCM)心肌细胞Fas/FasL、Fas相关死亡结构域(Fas-associated death domain,FADD)、Bcl-2/Bax、caspase-3蛋白的影响,探讨替米沙坦对心肌细胞的保护作用及其作用机制.方法 18头家猪随机分为3组(每组n=6):快速右心房起搏组(TCM组),实验猪植入永久起搏器,起搏频率500次/min;快速右心房起搏加替米沙坦组(TCM+TS组),起搏器植入前3天至起搏2周后,每日给予替米沙坦(1.5 mg·kg-1·d-1)混于饲料中喂服;对照组,实验猪未植入起搏器也未服药.每周记录1次心电图,实验前后经胸心脏超声观测猪左心室舒张末期内径(LVEDD)和左心室射血分数(LVEF).2周后处死动物,取左心室组织,Western blot技术检测Fas/FasL、FADD、Bcl-2/Bax、caspase-3蛋白含量,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测fas、caspase-3 mRNA转录水平.结果 TCM组较对照组左心室心肌细胞Fas/FasL、FADD、Bcl-2/Bax、caspase-3蛋白表达量均明显增高(P<0.05),TCM+TS组较TCM组Fas/FasL、FADD、Bcl-2/Bax、caspase-3蛋白表达量均明显降低(P<0.05).TCM组较对照组左心室心肌细胞fas及caspase-3 mRNA表达明显增高(P<0.05),TCM+TS组较TCM组fas及caspase-3 mRNA表达明显降低(P<0.05).Fas与caspase-3蛋白表达呈明显正相关(r=0.987,P<0.01);fas与caspase-3 mRNA表达呈明显正相关(r=0.950,P<0.01).结论 替米沙坦通过抑制Fas/FasL通路相关蛋白的表达,进而减少细胞凋亡,延缓TCM病情进展.
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融合基因FADDdel-GFP修饰在胰岛细胞自杀效应中的作用
目的 研究FADDdel-GFP在Fas/FasL介导的胰岛细胞自杀效应中的作用.方法 采用DNA转染技术将重组体pFADDdel-GFP导入哺乳动物细胞NIT(鼠胰岛细胞瘤细胞);采用FACS检测细胞因子诱导后NIT细胞的Fas和FasL表达情况及细胞自杀效应;采用active caspase3检测试剂盒检测细胞因子作用前后NIT细胞的caspase-3活性变化.结果 NIT细胞表面无Fas和FasL表达,细胞因子可促其表达增加;细胞因子作用后,FADDdel-GFP修饰的NIT细胞的细胞损伤百分率和细胞内caspase3活性明显低于对照组.结论 FADDdel-GFP修饰的NIT细胞具有一定的抵抗Fas/FasL途径介导细胞自杀效应的能力.
关键词： Fas相关死亡结构域 Fas FasL 细胞因子
