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葡激酶突变体文献资料
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聚乳酸-羟基乙酸微球内葡激酶突变体(K35R)的稳定性研究
目的 研究微球内葡激酶突变体(K35R,DGR)的存在状态和影响其稳定性的主要因素.方法 使用傅里叶变换红外光谱法(FT-IR)研究了微球内DGR的二级结构的变化,并纤溶活性测定法考察了pH和聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)表面对DGR稳定性的影响.结果 ①包封的DGR的二级结构明显发生了改变,但是,这种改变是β-折叠受到微扰的结果,并未影响微球内DGR的稳定性;②体外释放时,微球内PLGA的降解产物产生的酸性微环境会导致DGR变性,在内水相中加入Mg(OH)2纳米粒可以抑制DGR的变性聚集;③对PLGA吸附DGR的研究表明,PLGA表面对DGR的吸附是离子相互作用和疏水相互作用共同起作用的结果,也是造成DGR失活的重要原因.结论 PLGA对DGR的包封会导致蛋白质药物的二级结构发生变化,但是并不影响微球内DGR的稳定性;导致微球内DGR变性失活的主要原因是微球内的酸性微环境,碱性添加物可以抑制这种变性失活.PLGA表面对蛋白质药物的非特异性吸附也会导致部分DGR的失活.
关键词： 葡激酶突变体 聚乳酸-羟基乙酸微球 蛋白质稳定性 傅立叶变换红外光谱 -
重组葡激酶突变体(r-SAKΔN)的纯化
重组葡激酶突变体基因在大肠杆菌中高效表达,产物以包涵体的形式存在于胞浆中.通过发酵,扩增工程菌,机械破菌,离心分离粗制包涵体,后者经纯化后用盐酸胍溶解,r-SAKΔN分子复性后用离子交换层析和分子筛脱盐,纯度达97%,比活性5×104HU/mg,Mr14000,等电点为pH6.8.
