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液相肽图法推断聚乙二醇化重组人生长激素的聚乙二醇修饰位点研究
目的 利用液相肽图法对聚乙二醇(PEG)化重组人生长激素(rhGC) (PEG-rhGH)的聚乙二醇修饰位点进行测定.方法 通过优化酶切条件,建立肽段分离度高、信息完整的液相肽图方法.继而通过引入高分辨率质谱,对重组人生长激素的液相肽图准确定性.后通过比较发生改变的修饰前后的肽段,推断聚乙二醇的修饰位点.结果 3个厂家的聚乙二醇化重组人生长激素中发生较为明显修饰的肽段有5个,分别为T1(N -end)、T4(lys38)、T13( lys140)、T14( lys145)及T15 (lys158).结论 液相肽图法可用于对结构复杂、不均一性较高的多位点异构体聚乙二醇修饰药物的位点测定.
关键词： 聚乙二醇化重组人生长激素 液相肽图法 聚乙二醇修饰位点 -
三硝基苯磺酸法测定聚乙二醇化重组人生长激素的平均修饰度
目的:建立测定三种不同结构聚乙二醇化重组人生长激素(PEG-rhGH)平均修饰度的三硝基苯磺酸法(TNBS).方法:采用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱(MALDI-TOF)测定PEG-rhGH的分子量,求得理论平均修饰度.既而通过正交试验、游离PEG干扰等方法学考察,建立TNBS法.结果:从质谱法可知PEG-rhGH的理论修饰度为10%,TNBS法测得三种PEG-rhGH的修饰度分别为为10%、12%及10%,与理论值相符.结论:TNBS操作简单,不需要专门的仪器,可作为测定PEG-rhGH平均修饰度的方法.
关键词： 聚乙二醇化重组人生长激素 三硝基苯磺酸法 平均修饰度 -
ELISA法研究聚乙二醇化重组人生长激素小鼠体内的药动学
建立了双抗夹心ELISA法检测小鼠血清中聚乙二醇化重组人生长激素(PEG-GH)的浓度.结果表明,PEG-GH和重组人生长激素(rhGH)浓度均在1～150ng/ml范围内呈良好的线性关系.PEG-GH以静脉注射与皮下注射两种途径给药,所得t1/2β分别为静注rhGH的34.8倍和39.8倍,清除率明显下降.表明PEG-GH具有长效作用.
关键词： 聚乙二醇化重组人生长激素 药物动力学 酶联免疫吸附分析法
