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萝卜硫素及其衍生物BSFN通过激活PI3K/Akt途径诱导SH-SY5Y细胞凋亡
目的 研究萝卜硫素(SFN)及其衍生物(BSFN)对SH-SY5Y细胞的增殖抑制活性及通过PI3K/Akt途径探讨其抗肿瘤作用机制.方法 四甲基偶氮唑蓝比色法测定其对SH-SY5Y细胞增殖抑制率;通过免疫荧光法、流式细胞术、蛋白质印迹法对其进行抗癌机制研究.结果 四甲基偶氮唑蓝结果显示,萝卜硫素和萝卜硫素衍生物处理细胞72 h的IC50值分别为13.27和5.21μmol·L-1,且呈现时间剂量依赖性;Hoechst33258染色荧光显微镜观察发现,萝卜硫素、萝卜硫素衍生物能诱导SH-SY5Y细胞核形态学改变,部分细胞呈现典型的凋亡形态学特征;Annexin V-FITC/PI荧光双染结果亦证实萝卜硫素、萝卜硫素衍生物可以诱导SH-SY5Y细胞发生凋亡;DAPI和DCFH-DA染色流式细胞术分析显示,萝卜硫素衍生物诱导SH-SY5Y细胞S期阻滞、细胞活性氧产生增加,且较萝卜硫素作用明显;蛋白质印迹分析发现萝卜硫素和萝卜硫素衍生物能调节PI3 K/Akt途径中凋亡相关蛋白的表达,同时检测细胞内Nrf2与Keap-1蛋白表达,发现Nrf2蛋白表达增加,Keap-1蛋白表达减少.结论 萝卜硫素衍生物通过PI3 K/Akt信号途径诱导SH-SY5Y细胞凋亡和S期阻滞,且作用优于萝卜硫素,可能成为一种新型的抗癌药物.
关键词： 萝卜硫素 萝卜硫素衍生物 SH-SY5Y细胞 细胞凋亡 PI3K/Akt信号途径 -
PIK3CA基因异常扩增对胶质瘤患者预后预测价值的研究
目的 探讨胶质瘤患者PIK3CA基因突变和扩增与临床结局相的相关性,为临床胶质瘤预后提供参考.方法 使用直接测序和实时定量PCR的方法,检测PIK3CA基因突变和异常扩增,并利用回归分析和相关性分析的方法分析二者与临床病例特性及结局的相关性,探讨二者与胶质瘤患者3年生存率的相关性.结果在50名胶质瘤患者中,有6例患者具有PIK3CA基因的突变,有41例患者具有PIK3CA基因的异常扩增.PIK3CA基因的异常扩增与磷酸化Akt有显著的相关性.在胶质瘤患者中,未发现PIK3CA基因的突变与其临床病例特性及临床结局的相关性.PIK3CA基因的异常扩增与胶质瘤患者的生存率具有显著的正相关性.胶质瘤患者的3年生存率分析显示,PIK3CA基因异常扩增的患者的3年生存率显著的低于无PIK3CA患者.结论 PIK3CA基因的异常扩增可能是胶质瘤患者中PI3K/Akt途径被激活的主要机制.PIK3CA基因异常扩增与胶质瘤患者预后差生存率低呈显著的正相关性.因此,PI3K/Akt途径可能成为胶质瘤治疗的有效治疗靶点.
关键词： 胶质瘤 PI3K/Akt信号途径 PIK3CA突变 PIK3CA扩增 预后 -
PI3K/AKT通路在低氧环境下对结肠癌细胞HIF-1α及糖酵解的作用
目的 探讨缺氧环境培养下,阻断磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/丝氨酸苏氨酸激酶(serine-threoninekinase,AKT)信号途径后结肠癌细胞中缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)及糖酵解相关蛋白葡萄糖转运蛋白(glucose transporter 1,GLUT-l)和乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDH-A)的表达,分析PI3K/AKT信号通路与结肠癌细胞糖酵解之间的关系.方法 选择人结肠癌SW480细胞予以缺氧环境培养,分为4组:缺氧对照组、PI3K抑制剂组、AKT抑制剂组、PI3K+ AKT 抑制剂组,培养时间为24 h.采用 RT-PCR和Western blot法检测各组结肠癌细胞 HIF-1α及糖酵解相关基因(GLUT-1,LDH-A)的表达.比色法测定各组结肠癌细胞培养上清液中的乳酸浓度.结果 与缺氧对照组相比较,PI3K抑制剂组和 AKT 抑制剂组结肠癌细胞中 HIF-1α、GLUT-1、LDH-A表达下降(均 P<0.05),结肠癌细胞上清液中乳酸浓度降低(P<0.05).PI3K+ AKT 抑制剂组与缺氧对照组及单项抑制剂组相比,各项指标下降明显(P<0.01).结论 阻断PI3K/AKT 信号途径,结肠癌细胞中 HIF-1α表达下调,并可导致糖酵解相关基因GLUT-1、LDH-A的表达下降,提示PI3K/AKT信号途径参与了结肠癌细胞的糖酵解过程.
关键词： PI3K/Akt信号途径 结肠癌 糖酵解
