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联免疫吸附试验测定文献资料
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重组腺相关病毒载体中残余HEK293细胞蛋白含量检测方法的建立
目的 建立一个可靠的、可供临床应用检测的rAAV2-KAL残余HEK293细胞宿主蛋白(host cell protein,HCP)的测试方法.方法 Western blot方法鉴定rAAV,ELISA方法确定佳线性范围及低检测限,验证准确度及精密度.本实验连续生产并用二次氯化铯纯化3批rAAV2-KAL,使用ELISA方法检测rAAV2-KAL所含有的HCP含量,验证超速离心纯化工艺中的适用性.结果 建立的ELSA方法的佳线性范围为4～200ng.mL-1,低检测为4 ng·mL-1;不同浓度的HEK293细胞蛋白抗原回收率77.0％ ～ 115.0％,准确度较好;变异系数为8.2％～15.4％均低于20％,显示准确度和精密度均良好;制备的3批rAAV2-KAL经过二次CsCl纯化后,HCP含量均低于100ng·mL-1,显示该纯化工艺可有效去除HCP.结论 本实验成功建立HEK293细胞残余蛋白含量检测的双抗体夹心法ELSA方法,可用于rAAV病毒载体中HEK293宿主细胞蛋白残余含量的检测.
