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钙离子转运ATP酶文献资料
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肌浆网-内质网钙离子转运ATP酶干扰慢病毒表达载体构建及稳定转染PC12细胞株的建立
目的 构建肌浆网-内质网钙离子转运ATP酶(SERCA)基因的干扰慢病毒表达载体,建立稳定转染的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC 12)细胞系.方法 人工设计、合成针对SERCA基因干扰序列,退火后连接到PGLV3干扰载体上,与pGag/Pol、pRev、pVSV-G共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度,感染PC 12细胞,建立稳定细胞株;应用RT-PCR和Western blot技术检测PC 12稳定细胞中SERCA基因和蛋白表达情况,并与对照组进行比较.结果 成功构建了针对SERCA基因的RNAi慢病毒表达载体,病毒滴度为3×10s U·mL-1;建立稳定转染的PC 12细胞株.有效干扰验证显示,shSERCA能明显降低SERCA的mRNA及蛋白水平(P<0.01).结论 成功构建SERCA基因的shSERCA慢病毒表达载体,建立稳定干扰SERCA表达的PC 12细胞株.