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纳米技术在基因治疗中应用研究的现状
目的综述了用纳米颗粒、纳米胶束作为基因转移载体的应用研究现状.方法分析和归纳了纳米基因转运载体在基因转运系统中的三大主要屏障:①如何尽快逃脱网状内皮细胞系统对纳米的转运体捕捉;②如何尽快逃脱胞内溶酶体的吞噬作用;③如何保证质粒DNA在胞质内不被降解.结果与结论借以纳米基因载体设计与研制,提高基因转移效率,并列举近几年来国内外纳米基因载体研究状况,指出了纳米载体在基因表达与转染上还存在许多问题,但纳米基因转运技术的应用前景是无可置疑的.
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一种用流式细胞术检测基因转移效率的新方法
背景与目的:基因转移效率一直以来都是用表达报告基因的细胞(显色或发荧光)占细胞总数的百分比(即转染率)来表示,此百分比是由研究者借助显微镜(或荧光显微镜)计数得出来的.该方法(本文称为人工计数法)存在客观性、准确性不够和工作量大、且不能同时检测基因表达效率等问题.本研究拟寻找一种客观、准确、简便地检测基因转移和表达效率的新方法.方法:以绿色荧光蛋白(GFP)基因为目的基因、重组腺病毒(AdCMV/GFP)为基因载体,用人工计数法测定其对肝癌细胞株HepG2的转染率;用流式细胞术(flow cytometry,FCM)测定其对肝癌细胞株HepG2、Bel7402、Hep3B、SMMC7721和鼻咽癌细胞株CNE-2的转染效率和GFP(绿色荧光蛋白)基因的表达效率(以荧光指数表示).结果:以FCM测得AdCMV/GFP对HepG2的转染率与载体量呈对数相关(与人工法相似,但前者略高),荧光指数与载体量呈线性相关(r=0.9984),其它细胞株的结果与HepG2相似.结论:采用FCM法测定基因转移效率克服了主观因素的影响,测定结果客观准确,可以用于测定基因载体对真核细胞的转染效率,或研究转录调控元件的功能.
