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核糖-5-磷酸异构酶A文献资料
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变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A的表达、纯化与鉴定
目的 在大肠杆菌中高效表达变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A( ribose 5-phosphate isomerase A,rpiA ),并对表达产物进行纯化和鉴定.方法 根据GenBank中变异链球菌UA159株基因组rpiA的DNA编码序列,设计PCR引物,扩增变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A的DNA编码序列,将其克隆至pGEX-6p-1载体中,构建重组质粒,将测序正确的重组质粒转化入大肠杆菌BL21 (DE3)中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达；对培养温度、IPTG用量、诱导时间等条件进行了优化；用亲和层析、离子交换层析纯化目标蛋白；用SDS-PAGE和质谱对目标蛋白进行鉴定.结果 变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A在大肠杆菌中高效、可溶性表达,经质谱鉴定及SDS-PAGE分析,表达产物为变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A蛋白.经过纯化,得到纯度高达95％的变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A.结论 成功地在大肠杆菌中高效表达了变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A蛋白,并建立了纯化工艺,得到高纯度的重组蛋白,为进一步研究变异链球菌属核糖-5-磷酸异构酶蛋白的生物学活性及功能奠定了基础.
关键词： 变异链球菌 核糖-5-磷酸异构酶A 融合蛋白 原核表达 蛋白纯化
