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甲醛固定的不同组织中DNA提取的比较
目的 研究运用改良酚-氯仿法从甲醛固定组织中提取DNA的方法,对比心、肝、肺、脑4种脏器DNA提取质量的优劣,从而了解哪种经甲醛固定后的组织易于得到质量较为可靠的DNA,以达到对DNA扩增及后续研究的目的.方法 选取甲醛固定标本脏器各14例,以蛋白酶K消化和酚-氯仿法提取检材中DNA,对所得DNA质量以紫外分光光度计、PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳分析进行结果判断.结果 心、肝、肺、脑4种组织所提DNA的OD260/OD280比值分别为(1.842±0.380)、(1.861±0.076)、(1.387±0.113)、(1.428±0.087).每100毫克组织中DNA含量(μg)分别为(0.944±0.530)、(1.096±0.544)、(0.348±0.273)、(0.601±0.238).PCR扩增后经琼脂糖凝胶电泳分析显示,心肌和肝脏组织的条带清晰度高于肺脏和脑组织.结论 经甲醛浸泡固定的心肌组织和肝脏组织,运用改良酚-氯仿法所得DNA质量较为可靠,可以用于后续研究.
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9个miniSTR基因座在烧骨中的检测与分型
目的 对300℃焚烧后成人股骨样本进行9个miniSTR(D20S1082、D6S474、D12ATA63、D9S1122、D2S1776、D1S1627、D3S4529、D2S441、Amelogenin)基因座的检测与分型.方法 样本为8根经300℃焚烧后的成人股骨,用改良酚-氯仿法提取烧骨DNA,在Mastercylcer(R) pro梯度PCR仪上对9个miniSTR基因座分别进行扩增,3130基因分型仪检测并收集电泳结果,GeneMarkerV2.2.0软件计算扩增产物片段相对大小以及进行样本基因型分型.结果 8根烧骨样本均能够提取到DNA,浓度平均值为25ng/μL,D260/D280值在1.7 ～1.9之间.9个miniSTR基因座在样本中的检出率在78％～100％之间,分型图谱较清晰,个别样本出现额外带.结论 本文9个miniSTR基因座分型检测的方法,可用于对烧骨捡材的DNA分型检验.
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3种甲醛固定组织DNA提取方法的比较
目的 对不同方法提取甲醛固定组织中DNA的效果进行比较,寻找一种操作简便、经济实用、质量较高的DNA提取方法.方法 取甲醛固定的心肌组织14份,分别以改良酚-氯仿法,改良Trizol法,试剂盒法提取DNA,进行紫外分光光度计测定OD260/OD280值后,经PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳分析确定提取的DNA质量.结果 改良酚-氯仿法,改良Trizol法,试剂盒法OD260/OD280比值分别为1.841 5 ±0.380 4、1.370 5±0.336 7、0.831 6 ±0.175 0.两两比较均有显著性差异(P＜0.05).3种不同方法提取DNA含量分别为0.943 8±0.530 1、0.707 5 ±0.423 6、0.342 8±0.182 5.PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳显示以改良酚-氯仿法所提DNA的谱带清晰度好于其它两种方法.结论 改良酚-氯仿法简便有效,所用试剂价格低廉,是一种经济实用的甲醛固定组织DNA提取方法.
