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乳腺癌细胞中miR-1246、ZO-1、vimentin的表达及相关性研究
目的 检测miR-1246、ZO-1、vimentin在乳腺正常上皮细胞MCF10A和乳腺癌癌细胞MCF7、MDA-MB-231中的表达,并探讨miR-1246在促进乳腺癌上皮-间质化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用.方法 用荧光定量PCR法检测乳腺正常上皮细胞MCF10A、乳腺癌细胞MCF7、MDA-MB-231中miR-1246的相对表达量,用免疫印迹法检测乳腺正常上皮细胞MCF10A、乳腺癌细胞MCF7、MDA-MB-231中紧密连接蛋白ZO-1、波形蛋白vimentin的表达情况.采用SPSS16.0统计软件分析,用U检验、t检验和Spearman相关分析分析数据.结果 miR-1246和ZO-1在恶性乳腺癌细胞中的表达明显降低(P＜0.05),vimentin在恶性乳腺癌细胞中的表达明显增加(P＜0.05),miR-1246与ZO-1表达呈正相关(r=0.940,P＜0.05),miR-1246与vimentin表达呈负相关(r=-0.714,P＜0.05).结论 miR-1246表达水平与EMT标志物ZO-1、vimentin的表达水平存在一定的相关性,提示miR-1246在促进乳腺癌EMT过程中扮演重要角色.
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辐射诱导miR-1246对宫颈癌HeLa细胞上皮间质转化作用
目的 探讨辐射诱导的 miR-1246对宫颈癌 HeLa 细胞上皮间质转化(EMT)的作用.方法 经不同剂量60钴(60 Co)γ射线辐射处理的宫颈癌HeLa细胞,采用qRT-PCR检测miR-1246的表达水平.借助miR-1246及miR-1246-inhi-bition慢病毒表达载体,调变miR-1246在HeLa细胞中的表达水平,然后应用划痕实验及Transwell侵袭实验比较HeLa细胞的转移和侵袭能力;Western blot实验检测细胞中EMT相关分子的表达情况.结果 辐射可诱导miR-1246在宫颈癌HeLa细胞中表达(P<0.05).上调miR-1246表达,HeLa细胞出现间质细胞的形态改变,同时,细胞迁移能力增强,侵袭能力提高.在HeLa细胞中miR-1246表达上调,可降低细胞中E-cadherin的表达(P<0.05),同时升高N-cadherin的表达(P<0.05).结论 辐射可诱导miR-1246在宫颈癌HeLa细胞中表达,miR-1246通过调控E-cadherin和N-cadherin的表达促进宫颈癌He-La细胞发生EMT.
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miR-1246和miR-1261在模拟失重48 h后人肺微血管内皮细胞中的表达及生物信息学分析
目的:检测模拟失重48 h人肺微血管内皮细胞(HMVEC-L) miR-1246和miR-1261表达的改变,利用生物信息学方法分析预测其靶基因.方法:以回转器行模拟失重效应48 h的HMVEC-L为模拟失重组,同时设正常重力对照组,比较两组细胞miRNA表达谱的变化,应用Real-time PCR检测HMVEC-L细胞miR-1246和miR-1261的表达,通过TargetScan、miRDB和miRanda对miR-1246和miR-1261的靶基因进行预测以及功能注释和通路富集分析.结果:与正常重力对照组比较,模拟失重48 h可引起HMVEC-L细胞中29种miRNA呈现显著差异性表达,miR-1246和miR-1261显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05);生物信息学分析显示miR-1246和miR-1261的靶基因涉及生物过程、分子功能及细胞组成等多种功能,主要参与了磷酸化通路、凋亡相关通路和细胞骨架等相关分子的调控.结论:模拟失重48 h后可引起HMVEC-L细胞miR-1246和miR-1261的表达降低,提示其可能参与了模拟失重后内皮细胞功能异常的调控.
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miR-1246通过靶向GSK3β促进食管癌转移的机制
目的:探讨miRNA-1246(miR-1246)促进食管癌细胞转移的作用及其机制.方法:Realtime-PCR法检测miR-1246在癌旁组织、食管癌组织、正常食管上皮和食管癌细胞系中的表达差异.Transwell侵袭实验观察转染miR-1246 mimics或inhibitors对食管癌细胞EC109转移能力的影响;裸鼠尾静脉转移实验观察稳定表达miR-1246对食管癌转移能力的影响;生物信息学分析miR-1246的候选靶基因为GSK3β,荧光素酶报告基因实验检测过表达miR-1246后EC109细胞中野生型和突变型GSK3β的荧光素酶活性.Westernblot检测miR-1246对GSK3β蛋白表达的影响.结果:食管癌组织中的miR-1246表达显著高于癌旁组织（P<0.05)；多个食管癌细胞中miR-1246的表达比正常食管上皮细胞Het-1A明显增高（P<0.05).与阴性对照相比,miR-1246 mimics显著促进EC109细胞的侵袭能力（P<0.05).反之,miR-1246 inhibitors明显抑制EC109细胞的侵袭能力（P<0.05)；体内实验发现稳定过表达miR-1246明显升高EC109细胞的肺转移能力.荧光素酶报告基因结果证实miR-1246能够抑制GSK3β的3'-UTR区荧光素酶活性；转染miR-1246后,EC109细胞中的GSK3β蛋白水平明显低于对照组；miR-1246过表达显著抑制GSK3β-wt,而不能抑制GSK3β-mut的蛋白表达.结论:miR-1246能够通过靶向GSK3β促进食管癌转移,抑制miR-1246的表达或增加GSK3β的表达可能是抑制食管癌转移的有效手段.
