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鸦胆子素D对结肠癌HT29细胞株增殖的抑制及诱导其凋亡的机制
目的 探讨鸦胆子素D对结肠癌细胞株HT29增殖的抑制及诱导其凋亡的机制.方法 人结肠癌细胞株HT29经不同浓度鸦胆子素分别作用24、48、72h后,应用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测鸦胆子素D对HT29细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测鸦胆子素D对HT29凋亡的影响;Western blot法检测HT29细胞株经不同浓度鸦胆子素D处理24h后以及20μmol/L的鸦胆子素D处理24、48、72h后,细胞中JNK、p-JNK的表达.结果 不同浓度鸦胆子素D分别作用结肠癌HT29细胞24、48、72h后,细胞存活率随药物浓度升高,细胞存活率降低,细胞的凋亡率增加.HT29细胞株经不同浓度鸦胆子素D处理24h后以及20μmol/L的鸦胆子素D处理24、48、72h后,JNK蛋白表达随鸦胆子素D作用时间延长而下调,p-JNK则相应上调.结论 不同浓度的鸦胆子素D随着浓度的增加及时间的延长,结肠癌HT29细胞的存活率降低、凋亡率增高,呈明显的作用-时间-药物浓度依赖性.
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鸦胆子素D对高危型HPV16感染细胞的增殖抑制作用及对HPV16E6、HPV16E7mRNA表达的影响
目的 探讨鸦胆子素D对高危型人乳头瘤病毒(HPV) 16感染细胞的增殖抑制作用及对HPV16 E6、HPV16 E7mRNA表达的影响.方法 以人宫颈鳞状上皮永生化细胞株(Ect1/E6 E7)作为HPV16型感染的体外实验模型,而宫颈癌细胞株Caski作为阳性对照,不同浓度的鸦胆子素D分别体外作用于细胞24 h、48 h、72 h,采用噻唑篮(MTT)法测定细胞体外增殖活性,采用Real-time PCR法检测HPV16 E6、HPV16 E7基因mRNA的表达.结果 与同期对照组相比,观察组不同浓度的鸦胆子素D作用的细胞生长抑制率(CGIR)均明显增高,另外,与同一浓度作用24 h相比,作用48 h、72 h的CGIR均明显增高,差异均有统计学意义(均P＜0.05).即鸦胆子素D的浓度越高及作用时间越长,对Ect1/E6E7细胞生长的抑制作用越强.Ect1/E6E7细胞中,观察组不同浓度的HPV16 E6、HPV16 E7 mRNA的表达比较差异无统计学意义,两组比较差异亦无统计学意义(均P＞0.05).而随着鸦胆子素D溶液的浓度上升,Caski细胞中HPV16 E6、HPV16 E7 mRNA的表达升高,两组比较差异有统计学意义(均P＜0.05).结论 鸦胆子素D可抑制HPV16 E6、HPV16 E7 mRNA表达和HPV16细胞的增殖.
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鸦胆子素D对HPV16感染细胞株的作用及其可能机制
目的：研究鸦胆子素D对高危型人类乳头瘤病毒（HPV）16感染细胞的增殖抑制作用、促凋亡作用及其可能机制。方法：以人宫颈鳞状上皮永生化细胞株（Ect1/E6E7）作为HPV16型感染的宫颈癌前病变的体外实验模型，用1、5、10、15、30μmol/L的鸦胆子素D分别体外作用于细胞24、48、72 h，用3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法测定细胞增殖活性改变；以1、5、10μmol/L的鸦胆子素D分别体外作用于细胞24、48、72 h后，Cell cycle staining solution检测细胞生长周期变化，Hoechst 33258细胞核荧光染色法观察细胞凋亡情况，Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率。宫颈癌细胞株Caski含有完整的HPV16型E6、E7基因序列，以此作为阳性对照，通过实时荧光定量PCR技术检测两种细胞内HPV16 E6、E7基因mRNA的表达。结果：鸦胆子素D对Ect1/E6E7细胞具有明显的抑制体外增殖作用，MTT结果显示抑制作用呈时间和浓度依赖性（P＜0.05）。经1、5、10μmol/L鸦胆子素D体外作用48 h后，细胞生长周期停滞于G1期。流式细胞仪检测显示，各实验组细胞经鸦胆子素D作用48 h后，细胞凋亡率分别为（6.25±0.76）%（、20.21±1.32）%和（8.61±1.59）%，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。Hochest33258细胞核染色法显示细胞出现凋亡形态学改变。Real-time PCR技术检测结果显示Ect1/E6E7中HPV16 E6、E7 mRNA表达水平无明显下降，与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。而Caski中HPV16 E6、E7 mRNA表达水平下降，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：鸦胆子素D能有效地抑制Ect1/E6E7细胞增殖，其机制可能是通过抑制HPV16 E6、E7 mRNA表达从而促进细胞凋亡。
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鸦胆子素D对人胰腺癌细胞株Panc-1体外增殖的抑制作用
目的：探讨鸦胆子素D对人胰腺癌细胞株Panc-1体外增殖的影响。方法人胰腺癌细胞株Panc-1经不同浓度（0、5、10、20、40、60μmol/L）鸦胆子素D分别作用24、48、72 h后，应用CCK-8法检测鸦胆子素D对Panc-1细胞的增殖抑制作用；流式细胞术检测Panc-1细胞凋亡情况；Western blot检测Panc-1细胞经0、5、10、20、30、60μmol/L的鸦胆子素D处理24h后以及20μmol/L的鸦胆子素D处理24、48、72 h后，细胞中Bax及Bcl-2的表达。结果鸦胆子素D对Panc-1细胞的增殖抑制作用呈明显浓度和时间依赖性，60μmol/L时对Panc-1作用24、48、72 h后细胞存活率分别为54.44%、33.00%、21.63%，凋亡率分别为47.29%、63.80%、72.16%；0、5、10、20、30、60μmol/L的鸦胆子素 D作用于Panc-1细胞72h后的细胞存活率是100%、71.60%、60.37%、46.78%、39.98%、21.63%，凋亡率分别为0、26.63%、45.62%、56.18%、62.21%、72.16%；随着鸦胆子素D作用时间的延长或浓度的增加Bax蛋白的表达升高，Bcl-2蛋白的表达降低。结论鸦胆子素D可显著抑制人胰腺癌Panc-1细胞生长，并促进其凋亡，在一定的浓度和时间范围内，其作用呈明显浓度和时间依赖性，其作用机制可能是通过促进Bax的表达，降低Bcl-2的表达实现的。
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鸦胆子素D联合紫杉醇对胰腺癌Capan-2细胞增殖的抑制作用及机制研究
目的:探讨鸦胆子素D(BD)联合紫杉醇(Taxol)对人胰腺癌Capan-2细胞增殖的抑制作用及可能机制.方法:以Capan-2细胞为对象,采用磺酰罗丹明B法检测不同剂量BD(5、10、15、20μmol/L)、Taxol(10、20、30、40 nmol/L)、BD+Taxol(5μmol/L+10 nmol/L、10μmol/L+20 nmol/L、15μmol/L+30 nmol/L、20μmol/L+40 nmol/L)作用48 h后的细胞增殖情况,并计算细胞存活率和药物合用指数(CI).采用克隆形成试验检测BD(20μmol/L,下同)、Taxol(40 nmol/L,下同)、BD+Taxol(20μmol/L+40 nmol/L,下同)作用24 h后的细胞克隆集落形成情况,并计算克隆形成率;采用DAPI染色法观察BD、Taxol、BD+Taxol作用24 h后的细胞凋亡情况,采用Western blotting法检测的BD、Taxol、BD+Taxol作用后凋亡相关蛋白[Bcl-2、多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)、切割胱天蛋白酶3(Cleaved-caspase-3);药物作用48 h]以及c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)蛋白(药物作用4、6、12 h)的表达情况.结果:经10、15、20μmol/L BD,20、30、40 nmol/L Taxol以及两药上述剂量联合作用48 h后,细胞的存活率均显著降低,且联用组显著低于BD、Taxol同剂量单药组(P<0.05),各联用组(BD 5μmol/L+Taxol 10 nmol/L、BD 10μmol/L+Taxol 20 nmol/L、BD 15μmol/L+Taxol 30 nmol/L、BD 20μmol/L+Taxol 40 nmol/L)的CI值分别为0.63±0.04、0.68±0.08、0.89±0.12、0.84±0.05.经20μmol/L BD、40 nmol/L Taxol以及两药上述剂量联合作用后,细胞的克隆集落形成有所减少,并伴有不同程度的染色质浓聚和细胞核皱缩,细胞的克隆形成率(24 h)以及Bcl-2(48 h)、RAPR(48 h)、Caspase-3(48 h)、JNK(4、6 h,Taxol单药组除外)的相对表达量均显著降低,Cleaved-caspase-3(48 h)、p-JNK(4、6、12 h)的相对表达量均显著升高,且BD+Taxol联用组均显著优于同时间点BD、Taxol同剂量单药组[JNK(4、6、12 h)、p-JNK(4 h)除外](P<0.05或P<0.01).结论:BD、Taxol均可抑制人胰腺癌Capan-2细胞的增殖并促进其凋亡,且两者联合具有一定的协同作用,效果优于任一药物单用.上述作用可能与激活Caspase通路以及JNK磷酸化等途径有关.
