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microRNA-372靶向SDC1抑制人胰腺癌上皮间质转化及侵袭
目的 探讨microRNA-372(miR-372)靶向调控SDC1基因表达抑制人胰腺癌上皮间质转化及侵袭的机制研究.方法 收集人胰腺癌及癌旁组织手术标本;qRT-PCR和免疫组化法检测组织中miR-372和SDC1表达;筛选miR-372表达水平高的人胰腺癌细胞系进行分组和转染,实验分成6组,即空白对照组、阴性对照组、miR-372 mimic组、miR-372 inhibitor组、siRNA-SDC1组和miR-372 inhibitor+ siRNA-SDC1组;双荧光素酶报告基因试验验证miR-372和SDC1基因的靶向关系;CCK8法、流式细胞术、划痕试验及Transwell试验分别检测各组细胞转染后增殖能力、凋亡情况、迁移及侵袭能力;qRT-PCR和Western blot法检测各组细胞转染后SDC1和上皮细胞标志物E-cadherin及间质表型细胞标志物Vimentin的表达水平.结果 SDC1蛋白在胰腺癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常组织(P＜0.05).胰腺癌中miR-372、SDC1表达与肿瘤分化程度、转移和TNM分期显著相关(P＜0.05).双荧光素酶报告基因试验结果显示SDC1是miR-372的靶基因.与空白对照组和阴性对照组比较,miR-372 mimic组和siRNA-SDC1组细胞的生长、迁移和侵袭受到抑制,凋亡率增加,SDC1和Vimentin的表达水平明显降低,E-cadherin的表达水平明显升高(P均＜0.05);而miR-372 inhibitor组的趋势与miR-372 mimic组和siRNA-SDC1相反(P均＜0.05);然而,miR-372 inhibitor+ siRNA-SDC1组与空白对照组和阴性对照组比较,各项指标差异均无统计学意义.结论 miR-372可能通过靶向抑制SDC1基因表达,抑制人胰腺癌细胞的迁移、侵袭和上皮间质转化.
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卵巢癌中IncRNA HULC与miR-372的相互作用及对p62表达的影响
目的 探讨卵巢癌中lncRNA HULC与miR-372的相互作用以及二者对p62表达的影响.方法 分别在卵巢癌细胞系A2780、OVCAR3中过表达lncRNA HULC、过表达miR-372,通过RT-qPCR检测lncRNA HULC、miR-372、p62 mRNA的表达水平,Western blot检测p62蛋白表达水平,并分析三者之间的相互关系.结果 卵巢癌细胞系过表达lncRNA HULC后,RT-qPCR检测到miR-372表达水平下调;而过表达miR-372,lncRNAHULC表达水平下调.过表达miR-372后,p62 mRNA和蛋白表达水平下调,而过表达lncRNA HULC后,p62mRNA和蛋白表达水平上调. 结论 卵巢癌中lncRNA HULC与miR-372表达具有相互抑制的关系,二者共同调控p62表达.
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miR-372调控血管生成因子AGGF1的表达并抑制血管生成
目的:研究miR-372(miR-372)对新血管生成因子AGGF1基因的表达调控.方法:通过生物信息学预测找到可能靶向调控AGGF1基因的候选miRNA;通过荧光素酶报告基因实验、荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和Western blot检测等实验证实miR-372对AGGF1基因表达的靶向调控;通过体外血管内皮细胞成管实验检测miR-372对血管生成的影响.结果:生物信息学预测显示miR-372靶向AGGF1;荧光素酶报告基因实验证实miR-372可通过结合AGGF1基因3'-非翻译区(3'-untranslational region,3'-UTR)而抑制其表达;qPCR和Western blot实验分别表明miR-372在mRNA水平和蛋白水平下调AGGF1表达;体外血管生成实验表明miR-372所介导的AGGF1表达下调可明显抑制血管生成.结论:miR-372可通过靶向结合AGGF1基因的3'-UTR下调其表达,并抑制内皮细胞血管生成能力.
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急性髓系白血病患者miR-372的表达水平及其临床意义
目的 探讨miR-372在急性髓系白血病(AML)患者的血浆中的表达情况及其参与AML发病的可能作用机制.方法 实时定量PCR检测血浆中miR-372的水平.生物信息学软件预测miR-372可能的靶基因并通过双荧光素酶报告基因验证.在HL-60细胞中,敲低miR-372,通过划痕实验和克隆形成实验检测其对细胞迁移和克隆形成的影响.结果 AML患者血浆中miR-372的水平显著上调.受试者工作特征(ROC)曲线分析表明,miR-372可以区分AML患者以及健康对照组.双荧光素酶报告基因结果表明, miR-372可以抑制PTEN-3'UTR的活力.在HL-60细胞中敲低miR-372可以显著降低HL-60的细胞迁移率和克隆形成能力.结论 在急性髓系白血病患者血浆中,miR-372水平显著升高.通过靶向抑癌基因PTEN,miR-372可能成为一个潜在的筛查和诊断急性髓系白血病的非侵入性生物学标志物.
