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六种真菌毒素对培养软骨细胞的作用
1.目的方法真菌及其毒素中毒是大骨节病(KBD)重要病因学说之一,由于检出的优势真菌和毒素在各病区的结果不一致.我们用脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)、T-2毒素、雪腐镰刀菌烯醇(NIV)、互隔交链孢霉单甲醚(AME)、丁烯酸内酯(BUT)和串珠镰刀菌素(MON)等毒素对体外单层培养的幼兔关节软骨细胞进行损伤实验,测定软骨细胞DNA、基质葡萄糖醛酸量作为生长代谢的指标,并于倒置显微镜和透射电镜下观察细胞结构情况,了解这些毒素对KBD靶细胞-软骨细胞生长代谢和超微结构的作用,为KBD的病因研究积累基础实验资料.
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串珠镰刀菌素致软骨细胞损伤及硒保护作用的实验研究
本实验以串珠镰刀菌素MON和硒Se共同作用于体外培养的软骨细胞,观察其对软骨细胞及基质代谢的影响.结果显示:加MON 0.4、0.7、1.0mg/L组,随着毒素浓度的增加,软骨细胞损伤加重,NDA合成和细胞分裂增殖能力减低,细胞膜流动性逐渐降低,基质中葡萄糖醛酸含量逐渐减少,加Se0.1mg/L后以上影响有所减弱,但不能阻止损伤的发生.光学显微镜下观察各组细胞变化不大,电镜下毒素组细胞损伤明显,与对照组有显著差别.
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MON和硒对软骨Ⅱ型胶原的影响及与大骨节病的关系
目的 大骨节病是一种地方性、慢性、退行性骨关节病,主要损害关节软骨,病变呈对称性.目前,大骨节病病因并不清楚,在我国研究较多的是真菌中毒说和缺硒说.流行病学资料和以往的实验研究表明,串珠镰刀菌素是在大骨节病病区检测到的镰刀茵毒素之一,该毒素在病区、非病区间存在显著差异.因此,串珠镰刀茵素作为大骨节病的可疑致病因子可能与大骨节病的发生、发展具有一定的相关性.Ⅱ型胶原作为软骨细胞外基质主要成分,可以作为软骨损伤的检测指标,该研究的目的就是检测串珠镰刀茵素对软骨细胞和体外再建软骨组织的Ⅱ型胶原的影响,以及硒的保护性作用,为大骨节病是否为真茵毒素和环境缺硒复合因素作用的病因假说提供一些实验证据.方法 采用PT-PCR方法检测串珠镰刀菌素毒素对Ⅱ型胶原mRNA的影响;用免疫组织化学的方法检测Ⅱ型胶原、MMP1、MMP13的表达.结果 串珠镰刀茵素能够使Ⅱ型胶原mRNA的表达和原位表达均减少,同时MMP1、MMP13的表达增加;补硒能缓解上述变化.结论 串珠镰刀茵素毒素能够抑制Ⅱ型胶原mRNA的合成,同时MMP1、MMP13的表达均增加,促进其分解代谢,使Ⅱ型胶原原位表达减少;终导致软骨细胞损伤甚至变性坏死;补硒能减轻病情严重程度,但并不能完全阻止这些变化.这些都为进一步研究提供了实验证据.
