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明日地黄丸对糖尿病视网膜病变大鼠细胞自噬及Akt-mTOR通路的影响
目的 探讨明目地黄丸对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠视网膜组织中细胞自噬及对Akt-mTOR信号通路的影响.方法 采用高脂高糖饲料饲养联合腹腔注射链脲佐菌素(40 mg/kg)法制备DR大鼠模型,采用随机数字表法分为模型组、羟苯磺酸钙组(150 mg/kg)和明目地黄丸低(150 mg/kg)、中(300 mg/kg)、高(600 mg/kg)剂量组,每组10只,另设正常对照组10只,连续用药10周,监测各组大鼠体重及血糖.给药10周后,透射电子显微镜观察视网膜组织中细胞自噬小体数量;蛋白印迹法检测视网膜组织中自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白水平.结果 与正常对照组比较,模型组大鼠视网膜组织现空泡样变化、细胞排列稀疏紊乱等病理变化,自噬小体数目明显减少(P＜0.05),Beclin、LC3-Ⅱ蛋白表达明显下调(P＜0.05),p-Akt、p-mTOR蛋白表达显著上调(P＜0.05);与模型组比较,明目地黄丸低、中、高剂量组大鼠视网膜组织病理变化均显著改善(P＜0.05),自噬小体数目显著增多(P＜0.05),Beclin、LC3-Ⅱ蛋白表达显著上调(P＜0.05),p-Akt、p-mTOR蛋白表达明显下调(P＜0.05),呈剂量依赖效应.结论 明目地黄丸能抑制DR大鼠视网膜组织中细胞自噬过程,其机制可能通过Akt-mTOR信号通路调控自噬相关蛋白表达而实现.
关键词： 明目地黄丸 糖尿病视网膜病变 细胞自噬 Akt-mTOR信号通路 -
抗纤灵对5/6肾切除诱导的慢性肾纤维化小鼠Akt-mTOR信号通路的影响
目的 观察抗纤灵对5/6肾切除诱导的慢性肾脏纤维化小鼠磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)及Akt,mTOR mRNA表达的影响,从Akt-mTOR信号通路角度探讨抗纤灵的作用机制.方法 C57BL/6J雄性小鼠采用5/6肾切除制备慢性肾脏纤维化模型.2周后根据肌酐水平将手术组小鼠分为模型组、雷帕霉素组和抗纤灵组,同时设立假手术组,每组10只.雷帕霉素组、抗纤灵组分别给予雷帕霉素(0.8 μg/g)、抗纤灵(20 g/kg)每天0.5 ml灌胃治疗,模型组和假手术组灌胃等量蒸馏水.连续用药8周后处死小鼠,检测各组小鼠肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24小时尿蛋白(24 h UP)含量;采用蛋白质印迹法(Western blotting)、RT-PCR检测肾脏组织中p-Akt、p-mTOR蛋白及Akt、mTOR mRNA的表达.结果 与假手术组比较,模型组Scr、BUN、24 h UP、p-Akt、p-mTOR蛋白及Akt、mTOR mRNA显著升高(P＜0.05,P＜0.01).与模型组比较,雷帕霉素组、抗纤灵组Scr、UN、24 h UP、p-Akt、p-mTOR蛋白及Akt,mTOR mRNA均有所降低(P＜0.05,P＜0.01).雷帕霉素组与抗纤灵组比较,在降低Scr、24 h UP方面,抗纤灵组明显优于雷帕霉素组(P＜0.05);在降低p-mTOR蛋白及mTOR mRNA方面,雷帕霉素优于抗纤灵组(P＜0.05).结论 抗纤灵可能通过调节Akt-mTOR信号通路,对肾纤维化有一定的改善作用.
关键词： 抗纤灵 慢性肾纤维化 Akt-mTOR信号通路 -
独一味单体抑制脊髓背角内AKT-mTOR信号通路缓解大鼠神经病理性痛
目的:观察鞘内给予独一味单体8-O-乙酰山栀苷甲酯(8-O-acetyl-SM,8-OaS)对慢性神经病理性痛大鼠脊髓背角内丝苏氨酸蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)-哺乳动物雷帕霉素靶点(the mammalian target of rapamycin,mTOR)信号转导通路表达的影响.方法:采用大鼠腰5脊神经结扎(spinal nerve ligation,SNL)构建神经病理性痛模型,使用Von-Frey 细丝连续观察造模后大鼠术侧后足的痛阈改变;应用Westernblot法定量分析大鼠腰膨大节段AKT和mTOR的磷酸化水平;采用免疫荧光组织化学染色观察pAKT和磷酸化mTOR(pmTOR)在脊髓背角内的细胞定位.结果:由行为学数据可见,SNL模型大鼠机械性痛阈明显降低(P<0.01).术后1~7 d鞘内连续给予8-OaS进行人为干预,与给药前对比差异有统计学意义(P<0.05);免疫荧光双重标记记实验结果显示,脊髓背角内pAKT与星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)存在大量共表达,pmTOR在星形胶质细胞和神经元上均观察到大量阳性染色.Western blot实验结果提示,8-OaS能显著下调脊髓背角内pAKT和pmTOR蛋白的表达水平.结论:鞘内给予8-OaS可有效缓解由SNL诱导的机械性痛阈,其机制可能是8-OaS通过下调脊髓背角内AKT-mTOR信号通路的表达水平,进而抑制了星形胶质细胞的活化,从而达到缓解神经病理性痛的效果.
关键词： 8-O-乙酰山栀苷甲酯 脊神经结扎 星形胶质细胞 Akt-mTOR信号通路 大鼠
