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Hsp65与IL-2融合蛋白诱导小鼠细胞免疫应答及保护力
目的 研究Hsp65与hIL-2的融合蛋白在小鼠体内诱导的免疫应答及保护力.方法 在大肠杆菌中诱导表达Hsp65与hIL-2的融合蛋白,通过Ni-NTA亲合柱纯化后的蛋白经鉴定后,与佐剂DDA和MPL联合免疫小鼠,连续免疫3次,每次间隔2周,后一次免疫结束后两周,分离5只小鼠脾淋巴细胞,测定淋巴细胞增殖指数,IFN-γ和IL-2水平,以及特异性淋巴细胞杀伤功能,其余5只免疫小鼠用于MTB毒株攻击实验.结果 获得融合蛋白可分别与抗Hsp65和抗hIL-2的单抗发生特异性反应.融合蛋白免疫小鼠后,小鼠脾淋巴细胞被有效活化,诱导产生的γ-IFN和IL-2的水平以及CTL杀伤功能均显著高于BCG和单纯Hsp65免疫组(P<0.05).融合蛋白免疫组可有效抵抗MTB毒株攻击,脾脏细菌数显著减少(4.36±0.48),提供的保护力与BCG相当(4.30±0.53).结论 Hsp65与hIL-2的融合蛋白是一种有效的亚单位疫苗,可用于TB的预防.
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重叠区扩增基因拼接法拼接hIL-2信号肽基因和CVB3的VP1基因
目的:将hIL-2信号肽基因拼接到CVB3 VP1基因的5'端,以获得分泌型VP1(sVP1)基因.方法:采用重叠区扩增基因拼接法.结果:凝胶电泳见到预期大小DNA条带,经测序表明基因序列与报导的hIL-2信号肽及CVB3 VP1的基因序列一致.结论:成功获得了融合基因sVP1.
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稳定表达人白细胞介素2肝干细胞系的建立
目的:通过逆转录病毒介导,建立能稳定高效表达白介素2的肝干细胞WB-F344.方法:构建逆转录病毒载体Plpcx-IL-2质粒,转染包装细胞PT67,收集细胞培养上清,检测病毒的滴度.将高滴度的PT67/Plpcx-IL-2病毒液感染肝干细胞WB-F344,用嘌呤霉索加压筛选出抗性克隆,并用RT-PCR、间接免疫荧光实验、免疫组化实验和Western blot实验证实抗性细胞在转录水平和蛋白水平均有白介素2的表达情况.结果:成功构建含白介素2的逆转录病毒载体,获得滴度为10~5 CFU/ml的感染性病毒液.建立的细胞系在转录水平和蛋白水平均有白介素2的表达.结论:成功建立了稳定表达人白细胞介素2的肝干细胞系WB-F344/Plpcx-IL-2,为下一步开展研究以肝干细胞为载体肝癌免疫基因治疗奠定了基础.
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重组hIL-2腺病毒在体外癌细胞中的表达
为鉴定已构建的重组hIL-2腺病毒(AdvIL-2)在体外的感染和表达活性,体外转导人多种癌细胞系,通过ELISA法测定所表达IL-2 的量,MTT法测定所表达IL-2的活性.结果发现AdvIL-2能高效转导癌细胞,并检测到有10ng水平IL-2表达,持续时间为3周左右.
关键词： 重组hIL-2腺病毒 人白细胞介素2
