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C57BL/6小鼠系膜增生型肾小球肾炎的复制
目的 探索一种复制小鼠系膜增生型肾小球肾炎动物模型的方法.方法 80只C57BL/6小鼠随机分为4组(每组20只):A-正常对照组;B-竹叶青蛇毒2 mg/kg注射组;C-竹叶青蛇毒4 mg/kg注射组;D-竹叶青蛇毒6 mg/kg注射组.按照分组要求计算B、C、D 3组小鼠中每只小鼠需注射的竹叶青蛇毒的总量,配制3种不同浓度的竹叶青蛇毒液,B、C、D 3组小鼠分别尾静脉注射不同浓度的竹叶青蛇毒液0.2 mL,A组小鼠尾静脉注射生理盐水0.2 mL以进行对照.结果 竹叶青蛇毒注射后的小鼠均出现中毒性症状.C、D组小鼠因蛇毒注射剂量较大,死亡率高达50%,且集中于前3 d内死亡,3 d后中毒小鼠的活动基本如常.B组与正常对照组小鼠无死亡.中毒小鼠的肾功能与正常对照组相较无明显差别,但均出现了肾小球系膜细胞增生,系膜基质增多,肾小球及间质内炎性细胞浸润等病理学改变.结论 竹叶青蛇毒尾静脉注射是一种复制小鼠系膜增生型肾小球肾炎动物模型的较好的方法.
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骨髓来源细胞移植对实验性肾小球肾炎小鼠的作用
目的:利用骨髓移植的方法观察骨髓来源细胞在小鼠实验性肾小球肾炎中的作用.方法:以绿色荧光蛋白(GFP)标记的C57BL/6转基因小鼠为供体,同种无标记小鼠为受体鼠,受体鼠在接受供体骨髓细胞前经亚致死剂量60Co照射,并于移植5周后以尾静脉注射的方式接受竹叶青蛇毒注射;蛇毒注射后7、14、28、56 d利用免疫组织化学和免疫荧光双重染色方法观察受体鼠肾脏内的GFP阳性细胞及受体鼠肾脏病理变化,其中一组受体鼠在蛇毒注射后接受连续1周的粒巨系一集落刺激因子(GM-CSF)腹腔注射,观察GM-CSF对骨髓来源细胞及受体鼠的影响.结果:无论有无蛇毒损伤,荧光显微镜下受体鼠肾脏内均未见明亮的绿色荧光.GFP免疫组织化学可见所有受体鼠的肾小管上皮内均有少量细胞质棕褐色、细胞核大且紫蓝的GFP阳性细胞,包括那些骨髓移植后无蛇毒损伤的受体鼠;肾小球内也可见上述细胞,但在无蛇毒损伤的受体鼠内肾小球内未见上述细胞;激光共聚焦显微镜未见到明显双染色阳性的细胞,从形态上证实肾小球内的这些GFP阳性细胞大多为血细胞.那些接受GM-CSF注射的受体鼠肾脏内,GFP阳性细胞没有明显增加,而且肾脏损伤恶化,表现为蛇毒注射后1周出现了明显的局灶性节段性肾小球硬化.结论:骨髓来源细胞在蛇毒诱导的系膜增生型肾小球肾炎小鼠肾脏内向肾小管和肾小球细胞均可少量转化,但由于转化率低及肾小球结构的复杂性,向肾小球细胞的转化更加不易被识别;GM-CSF注射未能增加外源性骨髓细胞向肾脏实质细胞的转化而使受体鼠肾脏损伤恶化,于病程早期出现了局灶性节段性肾小球硬化.
关键词： 骨髓细胞绿色荧光蛋白 竹叶青蛇毒 系膜增生型肾小球肾炎 -
竹叶青蛇毒诱导不同品系小鼠系膜增生性肾炎模型的比较研究
目的：探讨竹叶青蛇毒（ habu snake venom，HSV）诱导C57BL／6小鼠和FVB／N小鼠系膜增生性肾炎模型的病理差异，为实验动物模型的选择提供科学依据。方法：取8周龄雄性C57BL／6小鼠（n=33）和FVB／N小鼠（n=52），单次尾静脉注射2．5 mg／kg竹叶青蛇毒建立模型。定期检测血尿素氮和肌酐水平，观察肾组织病理改变并进行病理评分，观察肾小球内PCNA免疫组化染色情况。结果：FVB／N小鼠的存活率（53．2%）明显低于C57BL／6小鼠（89．3%）。肾组织病理表现为C57BL／6小鼠在蛇毒注射后的第1和3天肾小球内出现显著系膜溶解病变，第7天肾小球系膜细胞增殖和系膜基质积聚，第14、21天病变肾小球逐渐恢复正常。FVB／N小鼠注射后第1和3天系膜溶解病变不显著，第7天存在系膜细胞增生，但病变程度低于同期C57BL／6小鼠。病理评分结果示C57BL／6小鼠在模型建立后系膜溶解指数和肾小球硬化指数均高于同期FVB／N小鼠。免疫组化结果显示两种小鼠肾小球内PCNA阳性率在第3、7天均显著高于对照组，其中C57BL／6小鼠肾小球内PCNA表达在第3天高于FVB／N小鼠。结论：静脉注射HSV能诱导小鼠发生系膜增生性肾炎病理改变，C57BL／6小鼠对该模型的耐受性和易感性均优于FVB／N小鼠。
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抗竹叶青蛇毒抗体F(ab')2的制备
目的:制备特异性强、高纯度的抗竹叶青蛇毒抗体F(ab')2.方法:以竹叶青蛇毒为免疫原免疫马,试血效价达到要求后,从免疫马血浆中先提取IgG,然后酶解、过疏水柱后得到F(ab')2片段,以免疫扩散实验检测抗体F(ab')2片段的特异性,以小鼠中和试验测定其中和竹叶青蛇毒的能力.结果:纯化得到的F(ab')2活性片段纯度可达90%;F(ab')2冻干品与竹叶青蛇毒在8∶1时出现免疫沉淀线,在20∶1时可保护小鼠100%存活.结论:纯化得到的抗体F(ab')2活性片段对竹叶青蛇毒具有较好的中和能力.
